[發明專利]提高米爾貝霉素A3/A4或其衍生物產量的方法

有效

• 申請號: 201810965937.0
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN110857447B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 陳少欣;蘆銀華;姜衛紅;衛科科;李雷;吳遠杰
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子植物科學卓越創新中心;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12N15/76;C12N1/21;C12R1/55
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種提高米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的產量的方法，其特征在于，所述方法包括：在米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌中，引入：

(1)?A1基因簇的milA1基因，所述的A1基因簇的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:?1所示或其互補序列；和

(2)?A2-R基因簇或其變體，所述變體中milF基因被敲除；所述的A2-R基因簇為milA2、milC、milE、milA4、sbi_00730、milF、sbi_00732、milA3和milR基因，所述的A2-R基因簇的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:?2所示或其互補序列；

所述米爾貝霉素A3/A4的衍生物為5-酮-米爾貝霉素A3/A4；所述生產菌為鏈霉菌(Streptomyces)。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，將(1)和(2)同時轉入到米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌中。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，分別獲取(1)和(2)的兩種基因簇、分別轉入到米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌中，之后通過接合轉移的方式，獲得同時攜帶(1)和(2)的兩種基因簇的生產菌。

4.?如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的鏈霉菌為吸水鏈霉菌(Streptomyces?hygroscopicus)。

5.?如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的(1)和(2)整合到米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌的ΦBT1?attB和ΦC31?attB位點。

6.?一種遺傳工程化的米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌在生產米爾貝霉素A3/A4或其衍生物中的用途，其特征在于，該菌株為鏈霉菌，其中引入了：

(1)?A1基因簇的milA1基因，所述的A1基因簇的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:?1所示或其互補序列；和

(2)?A2-R基因簇或其變體，所述變體中milF基因被敲除；所述的A2-R基因簇包括milA2、milC、milE、milA4、sbi_00730、milF、sbi_00732、milA3、milR基因，所述的A2-R基因簇的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:?2所示或其互補序列；

所述米爾貝霉素A3/A4的衍生物為5-酮-米爾貝霉素A3/A4。

7.如權利要求6所述的遺傳工程化的米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌的用途，其特征在于，所述的米爾貝霉素A3/A4或其衍生物的生產菌為吸水鏈霉菌(

Streptomyces?hygroscopicus)。