[發明專利]重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒及其構建和應用

在審

• 申請號: 201810963640.0
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109022376A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 祝秉東;白春香;何娟娟;呂薇;唐君霞;周利軍;韓江媛;牛紅霞
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;A61K39/39;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 蘭州智和專利代理事務所(普通合伙) 62201
• 代理人: 張英荷

1.重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒，其特征在于：重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15的基因序列如下：

。

2.如權利要求1所述一種重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的構建方法，首先構建了pDC316-IL-7-Linker載體；然后PCR擴增IL-15基因片段，將IL-15基因片段通過限制性內切酶酶切和連接酶連接的方法連接到pDC316-IL-7-Linker中，構建成pDC316-IL-7-Linker-IL-15；最后將pDC316-IL-7-Linker-IL-15和骨架載體pBHGlox△E1、3Cre轉染HEK293細胞并進行包裝，通過驗證并將包裝成功，得到重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15的腺病毒；其中Linker為(GGGS)₃。

3.如權利要求2所述一種重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的構建方法，其特征在于： pDC316-IL-7-Linker的載體構建，是以pUC57-IL-7-Linker質粒為載體，采用上游、下游兩條引物，PCR擴增出IL-7-Linker基因產物；該PCR產物經純化后，用Bgl II和HindIII進行雙酶切，克隆構建在質粒pDC316上，構建成pDC316-IL-7-Linker載體。

4.如權利要求3所述一種重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的構建方法，其特征在于：所述上游引物為：5’-3’GAAGATCT ATGTTCCATGTTTCTTTTAGATATATCTTTGG，其中斜體為Bgl II限制性酶切位點；下游引物為5’-3’ TAGGCAAGCTTACTTGGTGGTGGCGATGGTGGTGGACTT，其中斜體為Hind III限制性酶切位點。

5.如權利要求2所述一種重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的構建方法，其特征在于：所述重組基因載體pDC316- IL-7-Linker-IL-15的構建，是以pUC57-IL-15質粒為載體，采用上游、下游兩條引物，PCR擴增出IL-15基因產物；該PCR產物經純化后，用HindIII和Sal I進行雙酶切，克隆構建在質粒pDC316-IL-7-Linker上，構建成pDC316-IL-7-Linker-IL-15載體。

6.如權利要求5所述一種重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的構建方法，其特征在于：所述上游引物為：5’-3’ CCCAAGCTTATGAAAATTTTGAAACCATATATGAGGAATAC，其中斜體為Hind III限制性酶切位點；下游引物為5’-3’ ACGCGTCGACTCAGGACGTGTTGATGAACATTT，其中斜體為Sal I限制性酶切位點。

7.如權利要求1所述重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒作為細胞免疫佐劑的應用。

8.如權利要求7所述重組融合細胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒作為細胞免疫佐劑的應用，其特征在于：所述細胞免疫為結核亞單位疫苗誘導的細胞免疫應答。