[發明專利]藍細菌及其膜外囊泡在制備治療疾病藥物中的應用

有效

• 申請號: 201810959107.7
• 申請日: 2018-08-22
• 公開（公告）號: CN108703977B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 謝輝;殷豪;陳春媛;劉祎偉;譚藝娟;饒珊珊
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/748;A61P17/02
• 代理公司: 長沙軒榮專利代理有限公司 43235
• 代理人: 葉碧蓮

本發明提供一種藍細菌及其膜外囊泡在制備治療疾病藥物中的應用，所述藍細菌為S.elongatus；所述藍細菌或其膜外囊泡可用于增加燒傷皮膚周圍血管數量，提升燒傷后皮膚的愈合度。所述藍細菌或其胞外囊泡可用于制備治療燒傷的藥物。本發明公開的應用為治療燒傷尤其是深二度燒傷提供了新的安全有效的生物治療方向。

技術領域

本發明涉及微生物應用技術領域，具體來說，涉及一種藍細菌及其膜外囊泡(extracellular vesicles；EVs)在制備治療疾病藥物中的應用，尤其是涉及Synechococcus elongatusPCC 7942(細長聚球藻，以下簡稱S.elongatus)及其EVs在制備用于促進傷口、創面愈合、皮膚組織細胞再生和治療燒傷等疾病的藥物中的應用。

背景技術

燒傷是一種由熱力、化學物質、電力、放射線等導致的急性組織損傷，損傷部位主要是皮膚和/或黏膜。據統計，每年因意外傷害的死亡人數，燒傷位列前五之一。全國燒傷年發病率約為1.5％～2％，每年遭受不同程度燒傷的人數約有2500萬，以兒童和青壯年男性為主，其中約5％需要住院治療，給個人、社會、家庭帶來義重的負擔。過去數十年中，歸功于液體復蘇、感染控制等治療手段，因燒傷而死亡的人數有所下降。但是燒傷病人治療過程中，傷口愈合及瘢痕形成程度是最重要的評價治療效果的標準。目前，針對深二度及其以上的燒傷的治療手段以組織移植為主。組織移植包括自體移植和異體移植。自體移植確實改善了燒傷機體的代謝亢進反應和存活率，但是對燒傷創面很大或創面恢復有美容要求的患者并非最佳的選擇。在這些病人中，已有使用尸體皮膚或合成材料的案例，即異體移植。尸體皮膚移植是一種較易執行且廉價的方式，同時也存在被HIV、HSV和肝炎等傳染性疾病傳播的風險。應用合成材料覆蓋傷口，臨床結果表現出很好的生物相容性和促愈合特性，缺陷在于價格過于昂貴，不利于普遍性推廣及應用。因此，探尋一種相對廉價且又能促進傷口愈合的藥物顯得十分必要。

S.elongatus是一種可以進行光合自養的原核生物。以往研究者將它作為一種研究光合作用和晝夜節律的模式生物。2017年，Cohen等發現將進行光照處理的S.elongatus注射到大鼠的心肌梗死區域能夠明顯地增加局部區域的供氧、維持心肌代謝及改善梗死區的心肌功能，且未發現有明顯的免疫反應。皮膚義重燒傷的區域提供組織氧氣和養分的血管等遭到破壞，不利于損傷組織的恢復。

不論是真核生物還是原核生物都會分泌EVs。EVs主要由微泡(microvesicles，MVs)和外泌體(exosomes)組成。微泡是細胞激活、損傷或凋亡后從細胞膜脫落的小囊泡，直徑約為100nm-1000nm；MVs是細胞釋放到微環境中的質膜囊泡。普遍認為，EVs通過傳遞來源細胞的功能蛋白、脂質或核酸到靶細胞來實現細胞與細胞之間的交流。近來，Biller等首次提出藍細菌Prochlorococcus通過持續釋放EVs來支持異養細菌的生存。Pardo等發現Synechocystis PCC 6803也能釋放EVs。目前沒有報道顯示，S.elongatus能夠釋放EVs，也沒有相關的報道能夠證明該細菌釋放的EVs具有任何功效。

發明內容

針對相關技術中的上述技術問題，本發明提供了一種藍細菌及其EVs在制備治療疾病藥物中的應用，所述藍細菌及其EVs能促進傷口、創面愈合，能促進皮膚組織再生，可有效治療燒傷病癥。

為實現上述技術目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一方面，本發明提供一種由藍細菌分泌的EVs，其中，所述藍細菌為S.elongatus。

另一方面，本發明提供一種上述的EVs的制備方法，具體過程如下：

將S.elongatus加入培養基中進行傳代，光照培養、第一次離心，取上清再次離心過濾，濾液進一步經超速離心，所得沉淀為EVs。

進一步地，所述培養基的制備過程如下：將BG-11溶于雙蒸水，加熱加壓消毒，冷卻即得。