[發(fā)明專利]一種用于美麗百合花藥培養(yǎng)的分化培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810958418.1
• 申請(qǐng)日: 2018-08-22
• 公開（公告）號(hào): CN108849527A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建英;穆佳宜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇強(qiáng)農(nóng)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 長(zhǎng)沙新裕知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 43210
• 代理人: 趙登高

1.一種用于美麗百合花藥培養(yǎng)的分化培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，其特征在于，該分化培養(yǎng)基的配方如下：

大量元素：NH₄NO₃ 1300~1600mg/L， KNO₃ 1900~2300mg/L，KH₂PO₄ 550~600mg/L，MgSO₄·7H₂O 345~385mg/L，CaCl₂·2H₂O 620~650mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 18~22mg/L，ZnSO₄·7H₂O 7~9mg/L，H₃BO₃ 9~12mg/L，KI 0.6~0.8mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.22~0.28mg/L；

鐵鹽：FeSO₄·7H₂O 25~30mg/L，Na₂-EDTA 34~39mg/L；

少量有機(jī)添加物：肌醇95~105mg/L，谷胱甘肽34~40 mg/L，脯氨酸10~14mg/L，丙氨酸6~9mg/L，腐植酸鈉3.3~4.1mg/L，維生素B1 0.3~0.6mg/L，維生素B6 0.4~0.7mg/L，抗壞血酸0.25~0.30mg/L，牛磺酸0.42~0.48mg/L，復(fù)肽核酸0.33~0.37mg/L，馬來(lái)酰肼2.1~2.7 mg/L；

大量有機(jī)添加物：山梨醇12~15g/L，蔗糖22~26g/L，聚乙烯醇0.7~1.0g/L，植物凝膠1~3g/L；

植物提取液：豌豆提取液24~30mL/L，西瓜汁46~53mL/L；

無(wú)機(jī)添加物：活性炭0.3~0.5g/L，硝酸鈰0.8~1.2mg/L；

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：乙酰膽堿 0.4~0.6mg/L，N6-異戊烯基腺嘌呤 1.0~1.4mg/L，1-萘乙酰胺0.2~0.5 mg/L；

根據(jù)以上配方制備分化培養(yǎng)基的步驟如下：

（1）制備母液

大量元素制備成50倍的母液；微量元素、鐵鹽分別制備成200倍的母液；少量有機(jī)添加物中肌醇單獨(dú)加蒸餾水溶解，制備成100倍母液，其它成分制備成200倍母液；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑乙酰膽堿、N6-異戊烯基腺嘌呤和1-萘乙酰胺分別制備成質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的母液；各種母液制備完后分別儲(chǔ)存于玻璃瓶中，其中鐵鹽母液需要避光，應(yīng)儲(chǔ)存于棕色玻璃瓶中，再將各制備好的母液置于適宜的溫度下保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）制備植物提取液

豌豆提取液的制備：將豌豆粒洗凈后稱取約80g，加入500ml蒸餾水，煮沸30min后取出，再包于4~6層紗布中擠壓出汁液，靜置后取上清液即獲得豌豆提取液，置于4℃冷藏保存；

西瓜汁的提取：將新鮮西瓜瓜瓤取出切成小塊，放入榨汁機(jī)中榨成汁，稍靜置后過(guò)濾至密封容器中，置于4℃冷藏保存；

（3）配制混合培養(yǎng)液

先在燒杯中加入300mL蒸餾水，分別量取所需量的大量元素、微量元素、鐵鹽、肌醇、其他少量有機(jī)添加物、乙酰膽堿和1-萘乙酰胺的母液、豌豆提取液和西瓜汁加入燒杯中，再將稱量好的山梨醇、蔗糖、聚乙烯醇、活性炭、硝酸鈰加入燒杯中，攪拌溶解；

（4）配制培養(yǎng)基

用天平稱取所需的植物凝膠，放入燒杯中，再加入適量的蒸餾水，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀，然后再將上述配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的植物凝膠中，最后加蒸餾水定容至1 L，攪拌均勻；

（5）調(diào)節(jié)pH

用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉溶液，逐滴滴入制備好的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密pH試紙測(cè)培養(yǎng)基的pH，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH為5.6~6.0；

（6）培養(yǎng)基分裝與高壓蒸汽滅菌

待制備好的培養(yǎng)基稍微冷卻后，按照50ml /瓶將培養(yǎng)基分裝入150ml三角瓶中，塞上膠塞，包上錫箔紙，然后將培養(yǎng)基置于高壓蒸汽滅菌鍋中，調(diào)節(jié)溫度為121℃、壓力為15kPa，滅菌20min；

（7）培養(yǎng)基內(nèi)添加N6-異戊烯基腺嘌呤

按照50ml /瓶培養(yǎng)基的用量計(jì)算需加入的N6-異戊烯基腺嘌呤母液用量，待培養(yǎng)基降溫至約45℃時(shí)，在超凈工作臺(tái)中向每瓶培養(yǎng)基加入已滅菌的N6-異戊烯基腺嘌呤母液，趁熱搖勻，密封后自然冷卻。