[發明專利]一種雜交兜蘭無性克隆高效繁殖方法

有效

• 申請號: 201810949609.1
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN109105260B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 毛創學;吳坤林;曾宋君;鄭楓;房林;李琳;周依清
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 朱雙;劉明星

1.一種雜交兜蘭無性克隆高效繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.無菌播種：取雜交兜蘭果實消毒后將種子接種到種子萌發培養基上培養，待種子萌發形成原球莖時將其單個分開，繼續培養，原球莖增殖并分化成類原球莖和芽的混合體；

所述的種子萌發培養基：為1/8-1/4MS培養基添加20-100mL/L椰子乳、2-5g/L蛋白胨、0.5-1.5g/L活性炭、5-15g/L蔗糖、0.1-0.3g/L NaH₂PO₄和4.5-5.0g/L瓊脂，pH 5.8-6.0；

b.類原球莖和芽的混合體增殖：將類原球莖和芽的混合體切成包含4-8個類原球莖和3-6個芽的小團，接種到類原球莖和芽的混合體的增殖培養基上，進行增殖培養；

所述的類原球莖和芽的混合體的增殖培養基：為1/8-1/4MS培養基添加20-100mL/L椰子乳、2-5g/L蛋白胨、5-10g/L蔗糖、0.1-0.3g/L NaH₂PO₄和4.5-5.0g/L瓊脂，pH 5.8-6.0；

c.類原球莖和芽的混合體分化：將類原球莖和芽的混合體切成包含4-8個類原球莖和3-6個芽的小團，接種到類原球莖和芽的混合體的分化培養基上，進行分化培養；

所述的類原球莖和芽的混合體的分化培養基：為1/2-1MS培養基添加20-100mL/L椰子乳、20-25g/L蔗糖、0.1-0.3g/L NaH₂PO₄和4.5-5.0g/L瓊脂，pH 5.8-6.0；

d.不定芽誘導和叢生芽增殖：將分化培養后的類原球莖和芽的混合體切成每團2-4個芽，接種在不定芽誘導和叢生芽增殖培養基上培養，誘導不定芽和叢生芽增殖伸長；

所述的不定芽誘導和叢生芽增殖培養基：為1/2-1MS培養基添加20-100mL/L椰子乳、20-25g/L蔗糖、0.2-0.4mg/L NAA、0.1-0.3g/L NaH₂PO₄和4.5-5.0g/L瓊脂，pH 5.8-6.0；

e.生根壯苗培養：將大于或等于1.5cm長的芽從芽團中分離出來接種在生根壯苗培養基上培養，得到生根苗；

所述的生根壯苗培養基：為1/2MS培養基添加20-100mL/L椰子乳、50-100g/L香蕉勻漿、5-20g/L蔗糖、0.1-0.3g/L NaH₂PO₄、0.5-1.5mg/L NAA、0.5-2.0g/L活性炭和4.5-5.0g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雜交兜蘭是以Paphiopedilumkamioka為母本、杏黃兜蘭Paphiopedilum armeniacum為父本雜交獲得的。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟a-e中的培養條件為：培養溫度25-29℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12-16h/d。