[發(fā)明專利]綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記及其檢測(cè)引物、試劑盒、方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810943879.1
• 申請(qǐng)日: 2018-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108998540A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樂(lè)祥鵬;曹學(xué)濤;李發(fā)弟;李萬(wàn)宏;秦芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 成都天匯致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

1.一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記，其特征在于，所述標(biāo)記是綿羊EIF2S3Y基因片段第61位的G或C的單核苷酸多態(tài)性。

2.權(quán)利要求1所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的檢測(cè)引物，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物和所述反向引物分別為如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求1所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的檢測(cè)引物。

4.權(quán)利要求1所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測(cè)公綿羊全基因組DNA；

2)以待測(cè)公綿羊全基因組DNA為模板，以母羊DNA為陰性對(duì)照，以水為空白對(duì)照，利用檢測(cè)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增綿羊EIF2S3Y基因，得到擴(kuò)增產(chǎn)物，并于4℃保存；

3)用限制性內(nèi)切酶AciI消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物之后，再對(duì)酶切后的擴(kuò)增片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳；根據(jù)電泳結(jié)果鑒定綿羊EIF2S3Y基因上單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的的檢測(cè)方法，其特征在于，所述利用檢測(cè)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增綿羊EIF2S3Y基因的具體反應(yīng)過(guò)程為：先配置反應(yīng)體系：2× PCR SuperMix(TransGen Biotech)12.50μL，0.2μM的正向引物水溶液0.5μL，0.2μM的反向引物水溶液0.5μL，滅菌蒸餾水10.5μL，DNA模板50ng，以上體積總量為25μL；將反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，具體控制過(guò)程為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸50s，34個(gè)循環(huán)；72℃終延伸5min。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的的檢測(cè)方法，其特征在于，所述瓊脂糖凝膠電泳過(guò)程采用的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為2.5％。

7.權(quán)利要求1所述的一種綿羊EIF2S3Y基因的單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記在綿羊輔助選擇和分子育種中的應(yīng)用。