[發明專利]用于診斷糖尿病腎病早期階段的尿EVs生物標志物

在審

• 申請號: 201810943269.1
• 申請日: 2018-08-17
• 公開（公告）號: CN109765377A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 鄒和群;周琴;李小琳;谷東風;陳韻穎;寧靖;鄒子良
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學;廣東順德南方醫大科技園有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

本發明提供一種用于診斷糖尿病腎病早期階段的尿液細胞外囊泡(urine extracellularvesicles,尿EVs)生物標志物，以及診斷糖尿病腎病早期階段的方法。所述生物標志物為尿EVs內含的S100A8，其在糖尿病腎病早期階段表達量相對于正常人顯著降低。本發明的診斷方法是非侵入式的，有著巨大應用前景。

技術領域

本發明涉及蛋白檢測領域，具體涉及糖尿病腎病早期階段的尿EVs生物標志物的檢測。

背景技術

糖尿病已成為全球公共衛生問題。2015年，國際糖尿病聯盟(InternationalDiabetes Federation,IDF)宣布，中國有1.096億糖尿病患者，多數為2型糖尿病，在其血糖達到糖尿病診斷標準之前先出現空腹血糖受損和/或糖耐量異常，稱之為糖尿病前期(又被稱為前糖尿病)。這些患者盡管沒有明顯的血糖升高，但是已經開始出現器官損害，因此對其早期診斷有極其重要的意義，能更有效地防止糖尿病并發癥的發生。糖尿病腎病和腎衰竭是糖尿病常見的并發癥，目前確診糖尿病腎病依靠腎臟活檢穿刺，但這是一種有風險的有創性檢查。微量白蛋白尿可以診斷糖尿病腎病第3期，但當糖尿病腎病還處在第1,2期時，尿中還未出現微量白蛋白，這時如何診斷早期糖尿病腎病目前依然是國際上本領域研究的重點和難點。目前國內外還沒有公認的能在微量白蛋白尿出現之前早期診斷糖尿病腎病的尿液生物標志物。

尿液細胞外囊泡(extracellularvesicles，EVs)源自整個泌尿生殖道的多種細胞，釋放到尿液中，并且可以作為腎功能障礙和結構損傷的生物標志物。

糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)的主要并發癥，顯著增加心血管風險和相關死亡率。尿液細胞外囊泡(EVs)被認為不僅僅是腎損害標志物的豐富的非侵入性來源，也是全身器官或者是血管損傷的重要標志物來源。本發明作者試圖驗證尿EVs中的某些蛋白可能與糖尿病腎病存在關聯。

生理狀態下尿液中存在大量高豐度蛋白，例如Tamm-Horsfall蛋白，而能夠反映疾病早期信息的尿液中的蛋白常常是低豐度的，由于受到其他高豐度蛋白的影響，很難被特異敏感地檢測出來。有意義的是，這些反映疾病早期信息的尿液蛋白質很多存在于尿液的EVs中，如果我們能夠找到科學有效的富集尿 EVs的方法，然后檢測尿EVs中的能夠反映疾病早期信息的蛋白質，就能克服尿液中高豐度蛋白的影響。在本發明研究中，我們試圖在尿液EVs中尋找并驗證一種重要的生物標志物，最終可以對其進行評估或監測，以達到DN早期診斷的目的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種尿液EVs內含蛋白，用于在尿液出現微量白蛋白之前早期診斷糖尿病腎病早期階段。

我們假設在患有糖尿病腎病(DN)的患者的尿液EVs中可以發現不同的蛋白質，特別是在微量白蛋白尿出現之前。本項研究中，用于DN患者尿EVs研究的大量尿液樣本是在本課題組在南方社區人群開展ISN“KHDC”項目支持的社區分子流行病學研究中獲得的。在本研究中，采用雙向電泳技術分離來自患有DN 和健康受試者的患者的尿液EVs，并且通過MALDI TOF/MS分析對其蛋白質組分進行分析和定量比較。

通過電泳技術分離出患者尿液EVs中1980個蛋白斑點，其中40個蛋白斑點與NC組相比有至少1.5倍的顯著性差異。對上述40個蛋白斑點進行質譜鑒定，發現其中22種蛋白質可能與糖尿病腎病密切相關。

通過電泳分離了患者尿EVS中1980個蛋白斑點，其中有40個蛋白斑點與 NC組相比，有至少1.5倍的顯著性差異。對上述40個蛋白斑點進行質譜鑒定，最終選擇22種蛋白質進行進一步的分析。