[發(fā)明專利]未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810939900.0
• 申請(qǐng)日: 2018-08-17
• 公開（公告）號(hào): CN109116038A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張旭東;魯海冰;孫成艷;高威
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N21/76;G01N33/577
• 代理公司: 長(zhǎng)春眾邦菁華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

1.一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：

鏈霉親和素磁顆粒懸浮液

化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體

偶聯(lián)標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中，鏈霉親和素磁顆粒的質(zhì)量比為0.01％～1％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的鏈霉親和素磁顆粒懸浮液中，鏈霉親和素磁顆粒的粒徑為0.05～3μm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體中，未結(jié)合雌三醇單克隆抗體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的摩爾比為1:(3～20)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾或三聯(lián)吡啶釕。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的偶聯(lián)標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體中，未結(jié)合雌三醇單克隆抗體與偶聯(lián)標(biāo)記物的摩爾比為1:(5～20)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的所述偶聯(lián)標(biāo)記物為生物素或抗原。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括化學(xué)發(fā)光底物液，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液，所述A液為硝酸溶液，B液為氫氧化鈉溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括未結(jié)合雌三醇校準(zhǔn)品，所述的試劑盒未結(jié)合雌三醇校準(zhǔn)品的濃度分別為0.00ng/mL、0.43ng/mL、0.86ng/mL、1.72ng/mL、2.58 ng/mL、4.30ng/mL和8.60ng/mL的未結(jié)合雌三醇溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種未結(jié)合雌三醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：鏈霉親和素磁顆粒懸浮液的制備

將鏈霉親和素磁顆粒溶液和TBST溶液混勻后，放置在磁分離器上，直至上清液無混濁，棄上清，留取磁顆粒，清洗后在緩沖液中配成固相試劑，得到鏈霉親和素磁顆粒懸浮液；

步驟二：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體的制備

將未結(jié)合雌三醇單克隆抗體放入離心管中離心，然后加入碳酸緩沖液，混勻后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物溶液離心，將離心管密封后放入避光暗盒中，然后將暗盒放入氣浴恒溫振蕩器中混勻，加入封閉液，放入氣浴恒溫振蕩器中混勻，將封閉好的抗體經(jīng)過純化、收集，然后放入緩沖液中稀釋，保存；

步驟三：偶聯(lián)標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體的制備

取未結(jié)合雌三醇單克隆抗體，pH6.5的TRIS緩沖液透析純化后加入已活化的長(zhǎng)鏈磺化生物素，2～8℃反應(yīng)1～3h，再轉(zhuǎn)入室溫繼續(xù)反應(yīng)10～30min，最后加入賴氨酸反應(yīng)10～30min，經(jīng)純化，加入等體積甘油和NaN₃或ProClin300，得到偶聯(lián)標(biāo)記物標(biāo)記的未結(jié)合雌三醇單克隆抗體。