[發明專利]一種哈氏弧菌滅活疫苗及其制備和應用

在審

• 申請號: 201810934403.1
• 申請日: 2018-08-16
• 公開（公告）號: CN109010815A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 張健;孫黎
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: A61K39/106
• 分類號: A61K39/106;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/63
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

本發明涉及水產疫苗學領域，具體的說是一種哈氏弧菌滅活疫苗及其制備和應用。應用方法:將培養后的哈氏弧菌菌株T4經甲醛滅活24小時，重懸浮于PBS至終濃度為8.0×10⁹cfu/ml，與佐劑混合乳化后為哈氏弧菌滅活疫苗。所得滅活疫苗對哈氏弧菌感染的免疫保護效率可達85％以上。本發明所得的疫苗制備過程簡單、無需提取和純化并且無安全隱患，一次免疫即可達到高效和長期的免疫保護效果。

技術領域

本發明涉及水產疫苗學領域，具體的說是一種哈氏弧菌滅活疫苗及其制備和應用。

背景技術

經過數十年來的持續增長，中國已經成為全球第一水產養殖大國。但是隨著工廠化養殖規模的擴大，水產病害頻發發生，嚴重制約著水產養殖業的發展。目前，在中國針對細菌性疾病的主要防治手段是施用抗生素，但抗生素的大量使用造成水產品藥物殘留和細菌的耐藥性，破壞生態環境平衡，對人類健康形成潛在危害。疫苗作為一種水產動物病害防治的手段，在特異性、安全性和保護效果方面優于抗生素等藥物治療，被普遍接受和采用。在挪威、西班牙、北美等魚類養殖發達國家，多種商業化的滅活疫苗被普遍應用于鮭魚、鱒魚、鲇魚等規模化養殖中。

哈氏弧菌(Vibrio harveyi)是一種革蘭氏陰性細菌，廣泛分布于海洋環境中，是世界范圍內養殖動物疾病的主要病原菌之一。哈氏弧菌能侵染多種脊椎動物和無脊椎動物，引發動物發生出血性敗血癥并導致死亡。哈氏弧菌可以感染大范圍的經濟魚類，包括大菱鲆、牙鲆、澳洲肺魚、黃花魚和鯰魚等。目前，對哈氏弧菌病的防治仍然以抗生素和化學藥物為主，尚無有效的疫苗。常見報道的魚類疫苗有滅活疫苗、亞單位疫苗、減毒疫苗等傳統疫苗和DNA疫苗等。滅活疫苗安全性好、生產成本低廉，是水產行業最理想的疫苗。

發明內容

本發明目的在于提供一種哈氏弧菌滅活疫苗及其制備和應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種哈氏弧菌滅活疫苗，滅活后的哈氏弧菌用于制備免疫疫苗，所述細菌為哈氏弧菌T4；所述哈氏弧菌T4保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為：CGMCC No.1985，保藏日期2007.3.22，分類命名為哈氏弧菌(Vibrio harveyi)。

所述疫苗為將哈氏弧菌疫苗株于28℃經LB培養基培養至OD₆₀₀約為1.5，滅活后而后與佐劑混合即為疫苗。

一種哈氏弧菌滅活疫苗的制備：疫苗為將哈氏弧菌疫苗株于28℃經LB培養基培養至OD₆₀₀約為1.5，滅活后而后與佐劑混合即為疫苗。

所述滅活后菌液與佐劑混合，滅活后菌液與佐劑的體積比為3:7。

乳化佐劑為法國賽比克公司的商品化魚用佐劑Montanide ISA 763A VG。

所述培養至OD₆₀₀約為1.5的培養液經0.02％的甲醛28℃滅活24小時，PBS洗滌后離心收集菌液，菌液再經PBS重懸，菌懸液濃度為8.0×10⁹cfu/ml。

一種哈氏弧菌滅活疫苗應用，所述疫苗為哈氏弧菌免疫疫苗。

本發明具有如下優點：

本發明的哈氏弧菌滅活疫苗制備簡單，對環境和魚體均無安全隱患，所獲疫苗哈氏弧菌的侵染有顯著免疫保護效應，免疫保護效率可達85％以上。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例旨在對本發明進行舉例描述，而非以任何形式對本發明進行限制。

實施例1

哈氏弧菌滅活疫苗的制備。

步驟1)