[發明專利]一種黃瓜幼胚組織培養的方法

有效

• 申請號: 201810930306.5
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN108849524B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 陳宸;陳惠明;劉曉虹;楊博智
• 申請（專利權）人: 湖南省蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02
• 代理公司: 長沙七源專利代理事務所(普通合伙) 43214
• 代理人: 鄭雋;吳婷

1.一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，包括如下步驟：

A)幼胚獲得：取田間授粉后的黃瓜沖洗干凈，用酒精棉球擦拭黃瓜果皮2-3次；再將黃瓜切成兩半，最后將黃瓜幼胚輕輕取出，接種；

B)初代培養：將幼胚接種于初代培養基中培養；

C)繼代培養：選擇初代培養后苗高在4cm以上且具有3-5個腋芽的外植體，剪成帶有1-2個腋芽的莖段，接種于繼代培養基中培養，待外植體產生的叢生芽長有3-5個腋芽時，分離所述叢生芽，轉接至初代培養基中使腋芽伸長，苗高4cm以上后再轉接至繼代培養基中繼續增殖；

D)生根培養：選擇苗高4cm以上且具有3-5個腋芽的外植體，接種于生根培養基中培養；

E)組培苗煉苗和移栽：選擇苗高6cm以上、具有6-8個腋芽、已生根且根系發達的組培苗進行煉苗和移栽；

其中，所述初代培養基為1/2MS培養基+20g/L的碳源+6g/L的瓊脂粉+0.3-1.0g/L的核苷酸蛋白，pH值范圍為5.5-5.8；

所述繼代培養基為MS培養基+0.5-1.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+0.3-0.7mg/L的赤霉素+30g/L的蔗糖+6g/L的瓊脂粉+0.01-0.05g/L的絲氨酸，pH值范圍為5.5-5.8；

所述生根培養基為1/2MS培養基+0.3-0.6mg/L的萘乙酸+15g/L的碳源+6g/L的瓊脂粉，pH值范圍為5.5-5.8；

所述步驟A)中的黃瓜選擇主藤藤條距地面1/3之內的黃瓜；

所述步驟E)中，組培苗移植的培養土由水稻田土45％、泥炭土35％、沙20％配制，混合過篩后，高壓滅菌后使用，移苗后用1000倍30％惡霉靈噴灑培養土，幼苗成活后再往培養土上噴灑1次。

2.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述初代培養基中包括0.5g/L的核苷酸蛋白。

3.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述繼代培養基中包括0.03g/L的絲氨酸。

4.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述步驟A)中的黃瓜為田間人工授粉后25-30d的黃瓜。

5.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述步驟B)中的培養的條件為：所述幼胚未萌芽之前的培養溫度為28.0±0.5℃，黑暗培養；所述幼胚萌芽后培養溫度為25.0±0.5℃，光照強度為2000lx，光照時間為16小時/天。

6.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述步驟C)和/或步驟D)中的培養的條件均為：光照時溫度為25.0±0.5℃，黑暗時溫度為18.0±0.5℃，光照強度為3000lx，光照時間為16小時/天。

7.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述步驟E)中的煉苗的條件為：煉苗溫度為25.0±0.5℃下，光照強度為2000lx，光照時間為16小時/天，濕度應控制在85％以上。

8.根據權利要求1所述的一種黃瓜幼胚組織培養的方法，其特征在于，所述黃瓜為蔬研白綠、蔬研十二號、蔬研白淺、蔬研二號中的一種。