[發明專利]針對嘔吐毒素的TiO2

有效

• 申請號: 201810929822.6
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN109115751B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 戴宏;任卉竹;房丹丹;陳妍潔;衣歡;鄭祥欽;彭亦如;顏建英
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種針對嘔吐毒素的TiO₂-B整合型免過氧化氫電致化學發光傳感器的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）玻碳電極（GCE）首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；

（2）取1 mL 3 mg/ml的介孔納米二氧化錳（mp MnO₂）與1 mL 5 mg/ml的透明質酸 （HA）在超聲作用下混合均勻，將得到的均質溶液在室溫下機械振蕩4 h，經離心、洗滌，再分散制得HA@mp MnO₂復合物溶液；滴加5 μL濃度為3 mg/ml HA@mp MnO₂復合物懸浮液于干凈的玻碳電極表面，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，制得HA@mp MnO₂修飾玻碳電極；

（3）以0.1 mol/L 的高氯酸鋰（LiClO₄）為溶劑，在乙腈（acetonitrile）溶液中溶解0.01mol/L 3,4-乙撐二氧噻吩 (EDOT) 單體，在-0.5 至1.0 V的電位窗口下，用循環伏安法在步驟（2）制備的電極上連續掃描6次，最終的到PEDOT@HA@mp MnO₂修飾玻碳電極；

（4）取5 μL濃度比為2:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）及N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）混合液滴加到步驟（3）制得的修飾的電極上并在室溫下反應40 min，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，再滴加5 μL濃度為50 ug/mL嘔吐毒素抗體（Ab₁）溶液在室溫下孵育50 min，隨后用去離子水洗去物理吸附的嘔吐毒素抗體（Ab₁），制得Ab₁@PEDOT@HA@mpMnO₂修飾玻碳電極；

（5）取體積比為2:1的5 mg/mL TiO₂-B 溶液與1.0 wt. % BSA在室溫下混合震蕩5 h，洗滌、離心、再分散得到TiO₂-B@BSA復合物溶液；然后向上述混合溶液中加入100 μL 1.0×10^-6 mol/L氟代香豆素硅酞菁（F-couSiPcs）并在室溫下溫和搖晃1 h, 經離心、洗滌、再分散得到TiO₂-B@BSA@ F-couSiPcs復合物溶液；再依次向上述溶液中加入 100 μL 1.0×10^-2mol/L 魯米諾，50 μL 5 wt.% 戊二醛溶液，室溫下混合震蕩4 h，經離心、洗滌、再分散得到TiO₂-B@BSA@ F-couSiPcs@luminol復合物溶液, 最后再加入100 μL 50 ug/mL嘔吐毒素IgG抗體（Ab₂）溶液在室溫下震蕩50 min，經離心、洗滌、再分散制得整合型電致化學發光探針TiO₂-B@BSA@ F-couSiPcs@luminol@Ab₂復合物溶液，儲存在4°C冰箱中備用；

（6）將步驟（4）獲得的修飾電極浸入不同濃度的嘔吐毒素（DON）標準溶液中并室溫下孵育40 mim，用去離子水沖洗電極表面，制得DON/Ab₁@PEDOT@HA@mp MnO₂修飾玻碳電極，然后取5 μL步驟（5）制備的整合型電致化學發光探針TiO₂-B@BSA@ F-couSiPcs@luminol@Ab₂復合物溶液滴加到DON/Ab₁@PEDOT@HA@mp MnO₂修飾的玻碳電極上，在室溫下孵育50 min，用去離子水沖洗電極表面，制得TiO₂-B@BSA@ F-couSiPcs@luminol@Ab₂/DON/Ab₁@PEDOT@HA@mpMnO₂修飾玻碳電極。