[發(fā)明專利]一種骨髓間充質干細胞成骨分化誘導液

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810927000.4
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN108913656A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設計）人: 谷陽
• 申請（專利權）人: 谷陽
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種骨髓間充質干細胞成骨分化誘導液。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D可以有效促進骨髓間充質干細胞成骨分化，莪術內(nèi)酯B、玫瑰萜醛D作用不明顯。因此，可以將莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D制備成促進骨髓間充質干細胞成骨分化的藥物，也可將莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D添加到培養(yǎng)基制成促進骨髓間充質干細胞成骨分化的培養(yǎng)基。

技術領域

本發(fā)明屬于干細胞領域，涉及骨髓間充質干細胞成骨分化。

背景技術

骨髓間充質干細胞(BMSCs)是骨祖細胞，能誘導分化成多種類型細胞，包括成骨細胞、軟骨細胞等。報道表明，骨質疏松患者骨結構的損傷，與BMSCs成骨分化及增殖作用減弱有關。因此，增強骨形成是防治骨質疏松的一個重要策略。

促進BMSCs成骨分化是解決上述問題的切入點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在促進骨髓間充質干細胞成骨分化。

本發(fā)明上述目的通過如下技術方案實現(xiàn)：

一種骨髓間充質干細胞成骨分化誘導液，其特征在于：含有莪術內(nèi)酯A。

莪術內(nèi)酯A用于促進骨髓間充質干細胞成骨分化的用途。

莪術內(nèi)酯A在制備促進骨髓間充質干細胞成骨分化的藥物中的應用。

有益效果：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D可以有效促進骨髓間充質干細胞成骨分化，莪術內(nèi)酯B、玫瑰萜醛D作用不明顯。因此，可以將莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D制備成促進骨髓間充質干細胞成骨分化的藥物，也可將莪術內(nèi)酯A、莪術雙環(huán)烯酮、表玫瑰萜醛D添加到培養(yǎng)基制成促進骨髓間充質干細胞成骨分化的培養(yǎng)基。

附圖說明

圖1為待測化合物的化學結構式；

圖2為茜素紅染色結果；

圖3為骨鈣素表達水平。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例具體介紹本發(fā)明實質性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護范圍。

一、實驗材料

動物采用SPF級雌性SD大鼠，8周齡，體質量(200±20)g。

莪術內(nèi)酯A、莪術內(nèi)酯B、莪術雙環(huán)烯酮、玫瑰萜醛D、表玫瑰萜醛D購買或自制，純度不低于98％，化學結構式如圖1所示。

L-DMEN培養(yǎng)基購自Hyclone公司，胎牛血清購自Gibco公司，茜素紅購自Solarbio公司。PCR試劑盒購自Takara。

二、實驗方法

1、骨髓間充質干細胞的分離純化和培養(yǎng)

8周齡健康SD大鼠斷頸法處死，無菌條件下分離股骨，磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗3次后用咬骨鉗咬去骨兩骺端；用骨髓間充干細胞完全培養(yǎng)基(按體積分數(shù)配比：5％胎牛血清+1％雙抗+94％L-DMEM)沖洗骨髓腔制備骨髓細胞懸液；移液槍反復吹打制成單細胞懸液后，移至培養(yǎng)瓶中。顯微鏡下觀察細胞后將細胞置于5％CO₂、37℃、濕度75％的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。48h后首次更換培養(yǎng)基，之后每3天換1次培養(yǎng)基。待細胞80％融合后傳代，用胰蛋白酶消化細胞至大部分細胞重新懸浮，再加入完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化作用，200r/min離心5min，棄上清，用完全培養(yǎng)基重懸細胞后移至新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。反復傳代純化骨髓間充質干細胞，并在傳至第3代后進行成骨細胞的誘導。

2、分組及給藥