[發(fā)明專利]一種細(xì)胞外基質(zhì)的制備及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810926892.6
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN109097322A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文皓旻
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州星燎生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 張清彥

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種細(xì)胞外基質(zhì)的制備，具體用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究；所述細(xì)胞外基質(zhì)由基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸組成，在無菌環(huán)境下，將稱量好的基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸混合均勻；所述細(xì)胞外基質(zhì)應(yīng)用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究，在腫瘤細(xì)胞接種過程中，將所述細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞懸液混合使用；本發(fā)明所獲得的細(xì)胞外基質(zhì)，具有較好的生物相容性、可增強(qiáng)細(xì)胞的抗藥性、可促進(jìn)細(xì)胞增殖，尤其可增加細(xì)胞的粘附作用；應(yīng)用于用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究，提高腫瘤細(xì)胞的移植成活率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種細(xì)胞外基質(zhì)的制備，具體用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究。

背景技術(shù)

將腫瘤細(xì)胞接種到雞胚上進(jìn)行異種移植建立移植瘤，是研究腫瘤較好的活體模型，其具有易于復(fù)制、操作簡單、適用范圍廣等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于腫瘤血管生成機(jī)制及抗腫瘤藥物篩選等研究。實(shí)驗(yàn)是通過收集指數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，按照一定細(xì)胞濃度進(jìn)行接種，在無菌環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。雞胚自身具有特異的生物環(huán)境，不同的腫瘤細(xì)胞對于雞胚生物相容性不同，導(dǎo)致細(xì)胞移植成瘤率差異性較大。

目前腫瘤細(xì)胞懸液的溶劑多以PBS為主，具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜pH緩沖作用，但是要維持較佳的條件保證生物活性物質(zhì)和增強(qiáng)生物相容性，就需要在細(xì)胞懸液中加入更多的成分，但是PBS為水溶性，稀釋細(xì)胞液，降低了細(xì)胞的粘附作用，從而降低了細(xì)胞的生物活性物質(zhì)。如何在保證細(xì)胞懸液生物相容性的同時(shí)，還可以提高細(xì)胞的粘附作用，這是我們研究的方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題提供一種細(xì)胞外基質(zhì)，參入細(xì)胞懸液中，一方面提高細(xì)胞的粘附性和生物相容性，另一方面促進(jìn)細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)抗藥性，提高腫瘤細(xì)胞移植的成功率。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案

一種細(xì)胞外基質(zhì)，所述細(xì)胞外基質(zhì)由基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸組成。

優(yōu)選地，所述多聚賴氨酸的濃度為0.01%~0.09%。

優(yōu)選地，所述基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸的質(zhì)量比依次為（1~10）:（1~8）:1。

優(yōu)選地，所述基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸的質(zhì)量比依次為（2~6）:（1~4）:1。

優(yōu)選地，所述基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸的質(zhì)量比依次為4:2:1。

一種細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：

S1、在低溫?zé)o菌環(huán)境下，將稱量好的基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸吸取到一個(gè)容器內(nèi)混合；

S2、在混合溶液中加入交聯(lián)劑；

S3、將混合溶液進(jìn)行吹打混勻，反復(fù)吹打3~5次；

S4、混勻后的溶液在低溫條件下靜置超過0.5個(gè)小時(shí)。

優(yōu)選地，在4℃無菌條件下，用移液器吸取基質(zhì)膠、纖連蛋白和多聚賴氨酸混合并進(jìn)行吹打混勻；吹打混勻后靜置在4℃條件下，不低于0.5小時(shí)即可使用。

優(yōu)選地，所述交聯(lián)劑為雙環(huán)氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，質(zhì)量比為1：3：4，所述交聯(lián)劑的添加量為總?cè)芤旱?%~5%。

一種細(xì)胞外基質(zhì)的應(yīng)用，所述細(xì)胞外基質(zhì)應(yīng)用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞懸液的混合比例為（v/v）=1:（1~5）。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞懸液的混合比例為（v/v）=1:2。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所獲得的細(xì)胞外基質(zhì)，具有較好的生物相容性、可增強(qiáng)細(xì)胞的抗藥性、可促進(jìn)細(xì)胞增殖，尤其可增加細(xì)胞的粘附作用；應(yīng)用于用于雞胚絨毛尿囊膜上細(xì)胞移植研究，提高腫瘤細(xì)胞的移植成活率。