[發明專利]一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型及制備方法

在審

• 申請號: 201810926891.1
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN108990900A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 文皓旻
• 申請（專利權）人: 廣州星燎生物科技有限公司
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;C12N5/073
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 張清彥

本發明涉及生命科學領域，其具體是一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M?CDX模型及制備方法，所述肺癌雞胚絨毛尿囊膜M?CDX模型為將異種物種的肺癌細胞移植到雞胚絨毛尿囊膜中構建而成的，制備方法包括將胚蛋在溫度為35℃?40℃、濕度為60%?80%的培養箱中孵育2?4天，在胚蛋頂端剪開1cmx1cm窗口；將（0.5?8）×10⁶數量的肺癌細胞摻入細胞外基質，制成細胞懸液，滴加到事先放于絨毛尿囊膜上的硅膠圈內，35℃?40℃、濕度為50%?65%條件下孵育3天，并鏡檢拍照；本發明以雞胚為模型，以肺癌細胞為移植對象構建肺癌雞胚絨毛尿囊膜M?CDX模型；M?CDX荷瘤的載體是一層帶有豐富血管的絨毛尿囊膜，比起傳統模型，具有實驗周期短，飼養成本低，方便操作等獨特優勢；本制備方法所需操作器械、實驗器材均簡單易用，價格低廉。

技術領域

本發明涉及生命科學領域，其具體是一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型及制備方法。

背景技術

腫瘤動物模型作為人類腫瘤的復制，是腫瘤研究中不可缺少的手段，隨著近代醫學發展，特別是腫瘤學和免疫學研究的需要，免疫缺陷動物的出現解決了移植腫瘤的免疫排斥問題，人體腫瘤移植于免疫缺陷動物，能保持其生物學特性，對于研究人體腫瘤的機制，藥物篩選提供了很大幫助。

CN103239479A提供了一種人原發性皮膚鱗狀上皮細胞癌腫瘤干細胞的動物模型建立方法，該方法包括：將收集的臨床病例皮膚鱗狀細胞癌組織制成單細胞懸液，分離出CD31-CD24-CD45-CD61-CD133+腫瘤干細胞群，再和1×10⁶人原代成纖維細胞，1×10⁶人原代內皮細胞懸混在基質膠中，再將其注射至經人性化裸鼠皮下致瘤部位的微環境中。

為了了解惡性腫瘤在體的生物學行為特點，往往需要構建腫瘤在體模型模擬腫瘤真實生存環境。雞胚絨毛尿囊膜（chorioallantoic membrance, CAM）在發育的早中期不排斥來自異種動物的組織、細胞移植，因此可作移植人類惡性腫瘤的接受體。CAM模型已廣泛應用于新生血管生成、微循環、腫瘤生物學等方面的研究。

membrane-based cell-derived ×enograft（M-CDX）基于膜的細胞來源的異體移植，即，將異種物種的肺癌細胞系移植到雞胚絨毛尿囊膜中構建的模型。此模型可用于血管新生與腫瘤發生發展的互相作用，以及篩選有效抗腫瘤化合物的研究。

傳統的CDX模型，荷瘤載體一般是裸鼠，裸鼠移植瘤可以保存原有組織學構造或各種功能，且將人癌組織的組織培養物移種于裸鼠時，能重現已在組織培養中消失的原有的癌結構。這些特征有助于分析人類腫瘤的性質，從而推動各方面的工作，為實驗腫瘤學提供新的有效的工具。但是，由于裸鼠的飼養和繁殖要求條件比較嚴格，價格比較昂貴，相關裸鼠移植腫瘤模型存在一定局限性。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型及制備方法，此模型為將異種物種的肺癌細胞移植到雞胚絨毛尿囊膜中構建而成的，制備方法包括將肺癌細胞種植在雞胚絨毛尿囊膜上后，在適合條件下孵育過3天，用顯微鏡鏡檢。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型，包括雞胚絨毛尿囊膜中移植有異種物種的肺癌細胞的雞胚。

優選地，所述異種物種為人。

優選地，所述肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型應用于抗肺癌藥物篩選。

一種肺癌雞胚絨毛尿囊膜M-CDX模型的制備方法，包括：

步驟1：將胚蛋在溫度為35℃-40℃、濕度為60%-80%的培養箱中孵育2-4天，在胚蛋頂端剪開1cm×1cm窗口；