[發明專利]能有效抑制豬瘟病毒感染的精確突變LamR基因及應用

在審

• 申請號: 201810926331.6
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN108949763A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 歐陽紅生;謝子聰;逄大欣
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N5/10;A61K31/713;A61P31/14
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的RNA序列，其特征在于：該sgRNA的RNA序列如：SEQ ID 1所示，互補鏈的RNA序列如：SEQ ID 2所示。

2. 一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的DNA序列，其特征在于：該sgRNA的DNA序列如SEQ ID 3所示，互補鏈的DNA序列如：SEQ ID 4所示。

3.如權利要求1或2所述的一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的RNA序列的制備方法，包括以下步驟：

1）在基因庫中調出豬LamR基因的序列，根據PAM序列（NGG）選擇用于基因編輯的sgRNA靶向的區域；

2）根據靶位點的序列，設計并合成對應的引物序列；

3）引物退火形成寡聚核苷二聚體（oligoduplex）；

4）將寡核苷酸二聚體連接到相應的質粒載體中，即可獲得sgRNA的表達載體；

5）篩選出具有較高切割效率的sgRNA;

6）根據篩選的sgRNA的切割位點設計單鏈的核苷酸載體（Donor）；

7）將sgRNA和單鏈核苷酸Donor同時通過轉染的方法引入到細胞中，后續再結合細胞篩選及鑒定技術即可獲得定點突變的細胞克隆。

4.如權利要求1、2所述的一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的DNA序列在抑制豬瘟病毒的吸附作用中的用途。

5.如權利要求1、2所述的一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的DNA序列在構建抗豬瘟病毒細胞系的應用。

6.如權利要求1、2所述的一種能有效編輯豬LamR基因的sgRNA的DNA序列在制備精確點突變抗豬瘟病毒基因編輯豬中的應用。