[發明專利]靶向EGFR抑制EGF促腫瘤細胞增殖的多肽

有效

• 申請號: 201810921676.2
• 申請日: 2018-08-14
• 公開（公告）號: CN109180787B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 屠志剛;李濡妍;劉晗青;盧子文;徐涵;任德萬
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P35/00
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本發明涉及一種靶向EGFR抑制EGF促腫瘤細胞增殖的多肽，屬于生物醫藥技術領域；本發明以表皮細胞生長因子EGF為靶分子，經噬菌體展示技術的淘選，以EGF為有效成分特異性洗脫結合靶分子的噬菌體得到生物活性多肽TUZG20；經本發明證實，該生物活性多肽TUZG20顯著抑制了由EGF引起的胃癌細胞增殖過程；本發明多肽序列較短，易于合成和實現規模化生產，能抑制EGF的促癌作用，具備后續開發成為抗癌藥物的潛力，在抗癌藥物研發方面具有重要應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及一種靶向EGFR抑制EGF促腫瘤細胞增殖的多肽。

背景技術

EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是表皮生長因子受體家族成員之一，廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞、角質細胞等細胞表面。EGFR信號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發揮著重要的作用。表皮細胞生長因子（EGF，Epidermal Growth Factor）是人體內的一種活性細胞因子，通過結合其受體EGFR來刺激細胞的生長、增殖與分化過程。EGF本是一種6 kD分子量大小的蛋白質，具有53個氨基酸殘基和三個分子內二硫鍵，等電點4.6，對熱穩定，是目前已知的最穩定的蛋白質之一。

在無配體結合狀態下，EGFR以單體的形式存在于細胞膜表面。當表皮生長因子受體EGFR結合EGF等配體后，可刺激EGFR的同源或異源二聚化，激活受體的內在蛋白酪氨酸激酶活性，而酪氨酸激酶的活化又可啟動信號轉導級聯反應，導致細胞內多種生物化學變化，例如：細胞內鈣水平升高，糖酵解和蛋白質合成增加，以及包括EGFR在內的某些基因表達增加等現象，最終導致DNA合成和細胞增殖。

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，大量研究表明，EGFR表達量與胃癌組織的分化程度呈正相關，EGFR的表達水平越高表明腫瘤的惡性程度越高。腫瘤細胞在絲裂原的刺激下，旁/自分泌大量的EGF，促進腫瘤細胞及正常細胞分裂增殖，形成惡性循環。胃癌的病情進展緩慢但持續發展，大多數胃癌患者在最初診斷時已有大量的轉移性擴散，這也是胃癌預后不佳的一個主要原因，有研究表明，EGF能夠促進胃癌細胞發生上皮-間質轉化，有助于腫瘤細胞浸潤和轉移。EGF及EGFR的表達與胃癌的分化程度、浸潤和轉移密切相關，是胃癌治療的潛在靶點。因此，以EGFR為靶點，通過干擾EGF/EGFR介導的信號傳導，來達到抑制腫瘤的增殖、侵襲等目的，為胃癌分子靶向治療的新思路。

目前，針對EGFR的腫瘤分子靶向藥物，按其性質主要分為兩大類：一類是單克隆抗體，目前在我國已上市的有西妥昔單抗、帕尼單抗、尼妥珠單抗等，但是單克隆抗體存在生產成本較高的問題；另一類是小分子抑制劑，已上市的有吉非替尼、厄洛替尼和拉帕非尼等，但是小分子抑制劑的毒副作用較強，用藥后患者不良反應較多。

EGFR信號轉導途徑在腫瘤細胞的增殖、損傷修復、侵襲及新生血管形成等方面起重要作用，因而靶向EGFR藥物已成為腫瘤治療的熱點。近年來，多肽類藥物已成為藥物研發的熱點之一，大多數多肽以細胞外分子為靶點，多肽藥物具備生物活性高，特異性強，毒性反應相對較弱，在體內不易產生蓄積，與其他藥物的相互作用比較少，與體內受體的親和性較好等眾多優點。噬菌體展示技術是一種篩選功能性短肽的新型生物技術，是一種將編碼多肽的外源基因或隨機序列的DNA分子群與負責表達噬菌體外殼蛋白的基因相互融合后，使外源DNA所編碼的蛋白質以融合蛋白形式表達在噬菌體外殼表面的方法。被展示的多肽或蛋白可在噬菌體的表面保持相對的空間結構和生物活性。通過噬菌體展示技術可以經多輪的“親和，洗脫，擴增”步驟，實現高通量親和篩選。噬菌體展示技術是一種簡便、有效、易于控制的用于表達外源基因的操作系統，實現了表型和基因型的統一，具有廣泛的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型的EGFR靶向多肽，具體提供一種由噬菌體展示技術篩選得到的以EGFR為靶點的具有抗腫瘤活性的多肽。

本發明提供一種抑制EGF促腫瘤細胞增殖的多肽，所述多肽為TUZG20，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，具體序列信息為：