[發明專利]一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法

在審

• 申請號: 201810921260.0
• 申請日: 2018-08-14
• 公開（公告）號: CN109045282A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 李霞;劉曉芳;韓萍;張妍;李閏洲;左鈞
• 申請（專利權）人: 東營鳳起生物科技發展有限公司
• 主分類號: A61K38/19
• 分類號: A61K38/19;A61P15/08;A61P19/10;C12N5/0775;A61K35/51
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 楊潤

1.一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：包含有以下步驟：

第一步，制備臍血細胞因子，制備臍血干細胞；

第二步，激發自體外周血干細胞；

第三步，將臍血細胞因子輸注血液，使臍血細胞因子與自體外周血干細胞相聯合進行治療；

第四步，定期隨訪治療者的各項指標變化。

2.根據權利要求1所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：

所述臍血細胞因子是包含有GDF11和XZZY-5的臍血血漿，臍血細胞因子具體提取過程為：分離臍血血漿，經檢測臍血血漿中含有臍血細胞因子GDF11和XZZY-5；臍血經高速分離機離心使血細胞與血漿分層，提取血漿，將血漿與配置FBS保護劑1：1在4℃混合，使DMSO終濃度為10％，采用1℃/min程序降溫將至-40℃，再以5℃/min的速率程序降溫快速將至-80～-100℃，然后投入液氮中保存備用。

3.根據權利要求1所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：

所述臍血干細胞是將臍血在無菌條件下采集單個核細胞，與配置FBS保護劑1：1在4℃混合，使DMSO終濃度為10％，采用1℃/min程序降溫將至-40℃，再以5℃/min的速率程序降溫快速將至-100℃，然后投入超低溫液氮中保存備用。

4.根據權利要求1所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：

在所述第二步中，激發自體干細胞的過程為：

a.對臍血干細胞進行37℃恒溫水浴復蘇，洗滌DMSO，使得DMSO濃度在1％以下；

b.對治療者靜脈滴注臍血干細胞一個單位，觀察2-3天后，皮下注射粒細胞集落刺激因子，以下簡稱G-CSF，用量為7μg/kg，2次/日，兩次用藥時間需間隔十小時以上，5-7天為一療程；

c.治療者用藥后每天觀察體溫和全身癥狀；第3天開始每天上午用藥后2h，采血查血常規，觀察各項指標變化；第4天開始血液涂片顯微鏡下觀察有無干細胞，如有干細胞觀察其數量及形態；一般5-7天左右干細胞數量達到峰值；

d.促使干細胞歸巢：當血液中干細胞達到峰值后，進行第二次臍血干細胞靜脈滴注，促使多余的干細胞歸巢。

5.根據權利要求1所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：

在所述第三步中，對臍血細胞因子進行37℃恒溫水浴復蘇，熱源檢測和內毒素檢測后輸注入治療者血液。

6.根據權利要求5所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：

所述臍血細胞因子復蘇，將臍血細胞因子37℃恒溫水浴，洗滌DMSO，使得DMSO濃度在1％以下。再離心洗滌，取少許上層上清加入到鱟試劑中進行熱源檢測和內毒素監測。最后，回輸的血型配對與靜脈回輸，取回輸者少許血液樣本與臍血細胞因子進行血液血型配對檢測，檢測合格后進行靜脈回輸。

7.根據權利要求1所述的一種采用臍血干細胞輸注聯合自體外周血干細胞延緩卵巢早衰和治療骨質疏松的方法，其特征在于：整個治療療程中，分別在治療者治療一個月、三個月、五個月、七個月后進行復查，通過體能測試結果、骨密度測試、結果退行性關節炎以及絕經后卵巢大小變化。