[發(fā)明專利]一種具有免疫原性的多肽、其抗體的制備方法以及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810917689.2
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN108840914B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 布日額;吳金花;王金良;錫林高娃
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古民族大學(xué)
• 主分類號: C07K14/315
• 分類號: C07K14/315;C07K1/30;C07K16/12;C12N15/31;C12N15/63;G01N33/569
• 代理公司: 長沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙) 43205
• 代理人: 許伯嚴

本發(fā)明公開一種具有免疫原性的多肽及其制備方法，以及能夠表達所述多肽的基因工程載體和基因工程細胞。本發(fā)明還公開了針對該多肽的特異性抗體的制備方法，所述抗體能夠用于檢測無乳鏈球菌，且具有較高的靈敏性和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體地涉及一種具有免疫原性的多肽，還涉及該免疫原性多肽的抗體的制備方法和用途，更具體地，涉及所述抗體在制備用于檢測無乳鏈球菌的試劑盒中的用途。

背景技術(shù)

無乳鏈球菌(Streptococcus agalactea)屬于B群鏈球菌，是重要的乳源性人畜共患的致病菌。在動物主要引起奶牛乳腺炎，在內(nèi)蒙古地區(qū)約70％以上牛乳腺炎是由該致病菌引起。無乳鏈球菌具有多種致病因子，特別是細胞黏附及感染密切相關(guān)的菌毛樣結(jié)構(gòu)，可以有效的幫助無乳鏈球菌在宿主細胞上黏附、定植，其菌毛島嶼PI-2a編碼的亞基蛋白基因簇中有3個有效保守性抗原組分，分別為菌毛骨架蛋白BP、輔助蛋白AP₁和AP₂。小鼠實驗研究表明，無乳鏈球菌菌毛島嶼亞結(jié)構(gòu)蛋白具有良好免疫保護性。

前期研究通過生物信息學(xué)篩選、確定牛乳腺炎無乳鏈球菌菌毛島嶼PI-2a輔助蛋白AP₁、AP₂及BP的主要抗原域，利用基因工程技術(shù)串聯(lián)表達3亞基基因的多表位融合蛋白，并對3個亞基融合表達蛋白進行抗原性研究，為研究牛乳腺炎無乳鏈球菌致病機制、新型免疫疫苗及檢測試劑提供實驗依據(jù)。但是，串聯(lián)表達3亞基基因的多表位融合蛋白的純化水平不高，難以達到進一步研究或應(yīng)用的需要。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題的至少一種，本發(fā)明的第一方面提供一種多肽，其包括SEQID NO:8所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列組成。

本發(fā)明的第二方面提供一種基因，其包括SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列或由SEQID NO:7所示的核苷酸序列組成。

本發(fā)明的第三方面提供一種基因工程載體，其包括本發(fā)明第一方面所述的基因。

本發(fā)明的第四方面提供一種基因工程細胞，其包括本發(fā)明第三方面所述的基因工程載體。

本發(fā)明的第五方面提供一種本發(fā)明第三方面所述的基因工程載體的制備方法，其包括以下步驟：

(1)獲得無乳鏈球菌核酸樣本；

(2)利用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:6所示引物對步驟(1)獲得的樣本進行擴增；

(3)步驟(2)擴增產(chǎn)品經(jīng)回收純化后連接到線性化的基因工程載體上。

進一步地，包括將所述基因工程載體轉(zhuǎn)化進原核表達細胞中并誘導(dǎo)所述基因工程載體表達的步驟。

更進一步，包括對多肽進行純化的步驟：

(1)將細胞經(jīng)超聲破碎，離心去除細胞碎片；

(2)在步驟(1)的上清液中加入硫酸銨溶液；

(3)將溶液放在磁力攪拌器上攪拌，使重組蛋白充分沉淀；

(4)離心收集沉淀，利用懸浮液進行懸浮。

在本發(fā)明的實施方案中，所述硫酸銨溶液的濃底為10％～60％，例如為10、20、30、40、50、60％，再例如為15、25、35、45、55％，優(yōu)選地，所述硫酸銨溶液的濃度為20％；所述懸浮液為PBS緩沖液或Tris-Cl緩沖液，任選地，所述Tris-Cl緩沖液的pH值為8.5，任選地，所述PBS緩沖液含有咪唑，優(yōu)選地，所述PBS緩沖液含有20mmol/L咪唑。

本發(fā)明的第六方面提供一種靶向本發(fā)明第一方面所述的多肽的抗體的制備方法，其特征在于，包括利用所述多肽免疫家兔的步驟。