[發明專利]一種基于雙功能納米顆粒的免疫學檢測方法

在審

• 申請號: 201810917636.0
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN109239330A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 李金峰;黎誠耀;李婷婷;張玲
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 廖苑濱

本發明公開了一種基于雙功能納米顆粒的免疫學檢測方法，所述雙功能納米顆粒上包被有催化底物顯色的酶或者信號分子，還包被有與檢測抗體或者抗原發生特異性結合的分子。該方法通過納米顆粒對檢測信號進行放大，實現高靈敏檢測。該方法可以將檢測靈敏性提高一到兩個數量級。

技術領域

本發明涉及一種免疫學檢測方法，具體涉及一種基于雙功能納米顆粒的免疫學檢測方法。

背景技術

ELISA是一種常用的檢測方法，該方法靈敏度高、簡便、成本低、易于操作，因而廣泛應用于臨床檢測、食品安全檢測、環境監測等諸多領域，成為免疫學檢測領域中一種最為常用的檢測方法。但是在某些需要高靈敏檢測領域，ELISA則難以施展拳腳。因而，提高ELISA的靈敏性是免疫學檢測方法研究的一個熱點。比如，化學發光免疫學檢測（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）、時間分辨熒光時間分辨熒光免疫檢測（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）是兩種最為成功的高靈敏檢測系統。這兩種檢測方法已經廣泛應用于臨床檢測，展示出強大的生命力。

隨著科技的發展，納米科技在生物醫藥領域的應用也越來越廣泛。其中，納米顆粒以其優良的理化屬性在生物學在診斷領域得到廣泛應用，但是現有采用納米顆粒實現信號放大的檢測方法的靈敏度還有待提高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基于雙功能納米顆粒的免疫學檢測方法，其利用了納米顆粒極大的比表面積，每個被夾心的抗原對應著更多的信號分子（酶、熒光基團等），因而可以大幅提高檢測信號強度，進而提高檢測的靈敏性。

本發明所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現：

一種基于雙功能納米顆粒的免疫學檢測方法，該雙功能納米顆粒上包被有催化底物顯色的酶或者信號分子，納米顆粒上還有與檢測抗體或者抗原發生特異性結合的分子。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述免疫學檢測方法為酶聯免疫吸附試驗、化學發光免疫檢測分析、時間分辨免疫檢測分析中的一種。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述酶為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶中的一種。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述雙功能納米顆粒上包被有辣根過氧化物酶和抗生物素抗體。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述雙功能納米顆粒上包被有鏈霉親和素和辣根過氧化物酶。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述雙功能納米顆粒的粒徑為10nm～100nm。

如上所述的免疫學檢測方法中，所述雙功能納米顆粒重懸于含有葡聚糖的重懸液中。進一步低，所述重懸液中的葡聚糖含量不小于5%。更進一步地，所述葡聚糖的分子量不大于10000。更進一步地，所述葡聚糖為α-葡聚糖或β-葡聚糖中的一種，或者兩者的混合物。

本發明具有如下有益效果：本發明利用了納米顆粒極大的比表面積，每個被夾心的抗原對應著更多的信號分子（酶、熒光基團等），因而可以大幅提高檢測信號強度，進而提高檢測的靈敏性。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進行詳細的說明，實施例僅是本發明的優選實施方式，不是對本發明的限定。

實施例1 檢測艾滋病毒P24蛋白

實驗設計：取1份陰性血清樣本和1份陽性血清樣本，用陰性血清將上述兩份樣本梯度稀釋，采用實驗方法和對照方法檢測梯度稀釋的樣本，比較兩種方法檢測靈敏性差異。

A.實驗方法：