[發(fā)明專利]一種針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810916683.3
• 申請(qǐng)日: 2018-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN109234367A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐志勇;秦偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢千麥醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6858
• 分類號(hào): C12Q1/6858;C12Q1/70;C12N15/11
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務(wù)所(普通合伙) 42247
• 代理人: 陳凱

1.一種針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的引物組，其特征在于：所述引物組合包括：檢測(cè)rtM204I突變位點(diǎn)的特異性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，檢測(cè)rtM204V突變位點(diǎn)的特異性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3，檢測(cè)rtL180M突變位點(diǎn)的特異性引物序列SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。

2.一種針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的探針，其特征在于：所述探針包括：針對(duì)rtM204I/V突變位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的探針序列SEQ ID NO.6，針對(duì)rtL180M突變位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的探針序列SEQ ID NO.7，所述序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)。

3.一種針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的酶混合液，其特征在于：包括RNaseH2和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:50～1:500。

4.一種針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：包括權(quán)利要求1所述特異性引物序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5，權(quán)利要求2所述探針序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，權(quán)利要求3所述酶混合液，PCR緩沖液、dNTPs。

5.如權(quán)利要求4所述的針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：包括如下試劑：

(1)PCR反應(yīng)預(yù)混液1：主要成分包括：PCR緩沖液、4種dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2混合而成的引物組；

(2)PCR反應(yīng)預(yù)混液2：主要成分包括：PCR緩沖液、4種dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.3混合而成的引物組；

(3)PCR反應(yīng)預(yù)混液3：主要成分有PCR緩沖液、4種dNTPs、探針SEQ ID NO.7、引物由SEQID NO.4和SEQ ID NO.5混合而成；

(4)酶混合液：主要成分包括：RNase H2和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:50～1:500；

(5)陰性質(zhì)控品：為經(jīng)過(guò)滅活處理的YMDD突變陰性的正常人血清；

(6)陽(yáng)性質(zhì)控品：為經(jīng)過(guò)滅活處理的YMDD rtM204I+rtL180M突變陽(yáng)性的人血清。

6.如權(quán)利要求5所述的針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述酶混合液中，RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:250。

7.如權(quán)利要求5所述的針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述探針序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端標(biāo)記有FAM熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)BHQ1。

8.如權(quán)利要求5所述的針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述引物序列SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4的3'端連接有間隔臂。

9.如權(quán)利要求5所述的針對(duì)乙型肝炎病毒YMDD基序區(qū)耐藥突變的試劑盒，其特征在于：試劑還包括DNA提取液。