[發明專利]一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒

在審

• 申請號: 201810915882.2
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN109234374A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 徐志勇;秦偉
• 申請（專利權）人: 武漢千麥醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6876
• 分類號: C12Q1/6876;C12N15/11
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 陳凱

1.一組用于檢測葉酸代謝基因分型的核酸序列，其特征在于：包括：包含MTHFR 677位點多態性的序列SEQ ID NO.1，包含MTHFR 1298位點多態性的序列SEQ ID NO.2，包含MTRR66位點多態性的序列SEQ ID NO.3。

2.一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的引物組合，其特征在于：所述引物組合包括：檢測MTHFR 677位點、MTHFR 1298位點以及MTRR 66位點的核酸序列SEQ ID NO.4～SEQ IDNO.12。

3.一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的探針，其特征在于：所述探針包括針對MTHFR677位點、MTHFR 1298位點以及MTRR 66位點的序列SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15，所述序列SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15的5’端標記有熒光基團，3’端標記有淬滅基團。

4.一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的酶混合液，其特征在于：包括RNase H2和熱啟動Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:50～1:500。

5.一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，其特征在于：包括權利要求1所述核酸序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3，權利要求2所述核酸序列SEQ ID NO.4～SEQ IDNO.12，權利要求3所述探針SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15，權利要求4所述酶混合液，PCR緩沖液、dNTPs。

6.如權利要求5所述的針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，其特征在于：包括如下試劑：

(1)PCR反應預混液1：主要成分包括：PCR緩沖液、4×dNTPs、SEQ ID NO.13～SEQ IDNO.15所示探針序列及人源性內標探針、由SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQID NO.8、SEQ ID NO.10以及SEQ ID NO.11混合而成的引物組、內標引物；

(2)PCR反應預混液2：主要成分包括：PCR緩沖液、4×dNTPs、SEQ ID NO.13～SEQ IDNO.15所示探針序列及人源性內標探針、由SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQID NO.9、SEQ ID NO.10以及SEQ ID NO.12混合而成的引物組、內標引物；

(3)酶混合液：主要成分包括：RNase H2和熱啟動Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:50～1:500；

(4)陰性質控品：去離子水溶液；

(5)陽性質控品1：為MTHFR 677位點為C堿基的核酸序列、MTHFR 1298位點為A堿基的核酸序列以及MTRR 66位點為A堿基的核酸序列三種混合而成；

(6)陽性質控品2：為MTHFR 677位點為T堿基的核酸序列、MTHFR 1298位點為C堿基的核酸序列以及MTRR 66位點為G堿基的核酸序列三種混合而成。

7.如權利要求6所述的針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述酶混合液中，RNase H2酶與Taq DNA聚合酶濃度比為1:200。

8.如權利要求6所述的針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述SEQ ID NO.13探針5’端標記有FAM熒光基團，3’端標記有淬滅基團BHQ1；所述SEQ ID NO.14探針5’端標記有VIC熒光基團，3’端標記有淬滅基團BHQ1；所述SEQ ID NO.15探針5’端標記有ROX熒光基團，3’端標記有淬滅基團BHQ1。

9.如權利要求6所述的針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述引物序列SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.12的3'端連接有間隔臂。