[發(fā)明專利]降解重金屬富集植株的微生物組合及降解方法

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• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN109055263A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設計）人: 陳曉明;羅學剛;王丹;張詳輝
• 申請（專利權）人: 西南科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C12N13/00;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/125;C12R1/645;C12R1/885;C02F101/20
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產(chǎn)權代理有限公司 51214
• 代理人: 詹永斌;易小藝

1. 降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述微生物組合為枯草芽孢桿菌(B. subtilis)-白腐菌(P. chrysosporium)-里氏木霉(T. ressei)-強啟動菌株QD-1(Pterula sp. strain QD-1)，其中枯草芽孢桿菌: 白腐菌:里氏木霉:強啟動菌株=0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。

2.根據(jù)權利要求1所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌: 白腐菌:里氏木霉:強啟動菌株=0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-1.2。

3.根據(jù)權利要求1所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌: 白腐菌:里氏木霉:強啟動菌株=1:1:1:1。

4.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述微生物組合菌濃度為OD₆₀₀₌ 0.8，pH7.0；所述植物為黑麥草、水稻秸稈、木屑和濾紙。

5.根據(jù)權利要求1所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述白腐菌、里氏木霉和強啟動菌株三種菌分開用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，所述細菌由細菌培養(yǎng)基培養(yǎng)；放置于37 ℃恒溫搖床中150rpm培養(yǎng)48h，然后分開取菌液進行復配；所述微生物組合用勻漿機將菌球打散，并再以無菌PDA培養(yǎng)基調(diào)節(jié)菌濃度。

6.根據(jù)權利要求5所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂0 g或20 g，蒸餾水1 L；培養(yǎng)基pH為6.8-7.2，優(yōu)化方案中pH為7；所述細菌培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基：酵母粉5 g，蛋白胨10 g，NaCl 10 g，瓊脂０g或20g，蒸餾水1 L ，pH 7.2-7.4。

7.根據(jù)權利要求1所述的降解重金屬富集植株的微生物組合，其特征在于：所述菌種有馴化的過程，包括以下步驟：

（1）菌懸液的制備：將已經(jīng)培養(yǎng)了的菌株制成對數(shù)期種子液準備誘變；

（2）紫外線誘變：實驗前將超凈工作臺周圍遮光，使光波被紫外燈照射后處于穩(wěn)定狀態(tài)，在空平皿中加入4 mL培養(yǎng)到20 h的菌液并將其在距離紫外燈24 cm的位置給予50 min的照射，每隔一段時間對平皿進行轉(zhuǎn)動；

（3）在無菌環(huán)境中將誘變處理完畢的孢子懸液梯度稀釋到10-4、10-5、10-6于分別含20、50、100mg U的剛果紅篩選培養(yǎng)基平板上涂布，在恒溫的條件下對被牛皮紙和黑塑料袋處理好的菌液做好記號后進行培養(yǎng)，篩選出的菌株為優(yōu)勢菌株。

8.根據(jù)權利要求1所述的一種降解重金屬富集植株的降解方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）重金屬富集植物蒸汽滅菌；

（2）添加無菌尿素溶液，同時添加接種量為10%的微生物組合的菌懸液；

（3）降解，時間30天。

9.根據(jù)權利要求7所述的一種降解重金屬富集植株的降解方法，其特征在于：

所述降解過程中，溫度25-40℃，初始pH值6-7.5，富集植物截段長度1-2.5 cm，初始含水量40-70%，尿素添加量1-2.5 g/kg；優(yōu)化方案中溫度40℃，初始pH值7.5，富集植物截段長度1.5 cm，初始含水量70%，尿素添加量2.5 g/kg。

10.根據(jù)權利要求6所述的一種降解重金屬富集植株的降解方法，其特征在于：所述降解過程在中試降解池中反應，中試降解池包括設有降解池、通氣管道、空氣泵、擋板和通風口，降解池內(nèi)為中空，擋板設在降解池內(nèi)并靠近降解池底面；通風管道固定于擋板一側面，通風口設于降解池頂端并靠近擋板側；空氣泵設于降解池外，通氣管道穿過通風口與空氣泵連接；優(yōu)化方案中所述中試降解池長、寬、高分別為480 mm、475 mm、225 mm；其容積為53.956 dm³；進一步優(yōu)化方案中所述擋板上還鋪設有一層孔徑邊長為1 mm的網(wǎng)格條，以防止實驗材料從通風口進入底部預留空間；優(yōu)化方案中所述擋板離降解池底面15 mm處，預留空間占降解池總體積的6.3%。