[發(fā)明專利]細(xì)胞上清的總蛋白定量檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810914869.5
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN109239352A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王培培;沈麗;鄧鉞;黃慶雷
• 申請（專利權(quán)）人: 北京弘潤天源基因生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/531;G01N21/78
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

本發(fā)明公開了細(xì)胞上清的總蛋白定量檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。該用于測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的蛋白質(zhì)含量的試劑盒,包括標(biāo)準(zhǔn)品包被的酶標(biāo)板和考馬斯亮藍(lán)G250染色液，所述標(biāo)準(zhǔn)品包被的酶標(biāo)板按照包括下述步驟的方法制備：將牛血清白蛋白用溶劑配制成牛血清白蛋白濃度不同的N種溶液，將所述N種溶液均分別加入酶標(biāo)板的不同孔內(nèi)，包被所述酶標(biāo)板，得到標(biāo)準(zhǔn)品包被的酶標(biāo)板；所述N為大于等于8的自然數(shù)；所述溶劑為pH值為7.4的磷酸緩沖鹽溶液。本發(fā)明實現(xiàn)了快速、靈敏和準(zhǔn)確地檢測液體中的總蛋白含量，可用于生物化妝品制備，抗體制備，中藥刺激細(xì)胞產(chǎn)生分泌物領(lǐng)域中的細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的蛋白質(zhì)含量的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)含量檢測領(lǐng)域中一種細(xì)胞上清的總蛋白定量檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是有機大分子，是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔(dān)者。沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位，氨基酸通過脫水縮合形成肽鏈。蛋白質(zhì)是由一條或多條多肽鏈組成的生物大分子，每一條多肽鏈有二十至數(shù)百個氨基酸殘基不等；各種氨基酸殘基按一定的順序排列。蛋白質(zhì)是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯(lián)系在一起的物質(zhì)。機體中的每一個細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)占人體重量的16.3％，即一個60kg重的成年人其體內(nèi)約有蛋白質(zhì)9.8kg。人體內(nèi)蛋白質(zhì)的種類很多，性質(zhì)、功能各異，但都是由20多種氨基酸按不同比例組合而成的，并在體內(nèi)不斷進(jìn)行代謝與更新。蛋白質(zhì)的不同在于其氨基酸的種類、數(shù)目、排列順序和肽鏈空間結(jié)構(gòu)的不同。蛋白質(zhì)是機體細(xì)胞的重要組成部分，是人體組織更新和修補的主要原料。人體的每個組織：毛發(fā)、皮膚、肌肉、骨骼、內(nèi)臟、大腦、血液、神經(jīng)、內(nèi)分泌等都是由蛋白質(zhì)組成。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液含有豐富多彩的分泌蛋白，比如：酶、抗體、蛋白質(zhì)類的激素、細(xì)胞因子等。細(xì)胞因子是可溶性蛋白，是機體多種細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，是由活化細(xì)胞分泌的具有高活性、多功能的主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)的小分子多肽，通過結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體發(fā)揮生物學(xué)作用，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，促進(jìn)造血，以及刺激細(xì)胞活化，增殖，分化等功能。由于基因工程、細(xì)胞工程研究的飛速發(fā)展，不僅克隆了早先發(fā)現(xiàn)的生物活性肽的cDNA，而且發(fā)現(xiàn)了許多新的細(xì)胞因子，并對各種細(xì)胞因子產(chǎn)生來源、分子結(jié)構(gòu)和基因、相應(yīng)的受體、生物學(xué)功能以及與臨床的關(guān)系等進(jìn)行了大量的研究，成為當(dāng)今基礎(chǔ)免疫學(xué)和臨床免疫學(xué)研究中一個活躍的領(lǐng)域。細(xì)胞因子對人類許多常見病、多發(fā)病及傳染性疾病的治療作用，已經(jīng)不是傳統(tǒng)療法(化學(xué)藥物治療、放射治療、手術(shù)治療等)所能比擬的。細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)、合成及其有關(guān)生物學(xué)特性已經(jīng)或?qū)⒁^續(xù)不斷被闡明，愈來愈多的細(xì)胞因子得以商品化。比如：生物化妝品，制備抗體，中藥刺激細(xì)胞產(chǎn)生分泌物研究領(lǐng)域等。

生物化妝品是指應(yīng)用生物工程技術(shù)及其制品制得的化妝品，其主要成分生物活性多肽大部分是細(xì)胞生長因子，它們在體內(nèi)含量極微，但生物活性極高，對多種細(xì)胞生理功能和代謝活動發(fā)揮生物調(diào)節(jié)作用，直接或間接地影響多種類型細(xì)胞的生長、分裂、分化、增殖和遷移，在美容護膚、整形外科、燒傷潰瘍以及各種皮膚病的傷口修復(fù)與愈合中有重要作用。細(xì)胞生長因子經(jīng)過穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)修飾或特殊的保護處理后，以一定的有效濃度添加到化妝品中，可以有效地與皮膚細(xì)胞發(fā)生作用，促進(jìn)上皮細(xì)胞營養(yǎng)代謝，保護皮膚，預(yù)防由于各種原因?qū)е碌钠つw損傷。正常護膚品中添加活性細(xì)胞生長因子還可以有效地促進(jìn)皮下膠原細(xì)胞的功能，加速皮膚膠原細(xì)胞的生長，使細(xì)胞加速分泌膠原，從而達(dá)到抗皺及延緩衰老的作用。

由免疫反應(yīng)抗原刺激機體后，產(chǎn)生的特異性反應(yīng)，包括細(xì)胞免疫、體液免疫，表現(xiàn)為免疫細(xì)胞分裂繁殖，產(chǎn)生淋巴因子，合成并分泌抗體。對于免疫細(xì)胞化學(xué)的技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強、親合力大、滴度高的特異性抗體。

由細(xì)胞自體產(chǎn)生的分泌蛋白，或由于藥物或外來條件刺激細(xì)胞產(chǎn)生的分泌到培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)目前已經(jīng)越來越多的商品化，研發(fā)測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中總蛋白含量的檢測試劑盒可以更好的監(jiān)測這類產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容