[發(fā)明專利]一種新型葡糖淀粉酶及其基因與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810913512.5
• 申請(qǐng)日: 2018-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN108949724B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田康明;牛丹丹;王正祥;路福平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/24
• 分類號(hào): C12N9/24;C12N15/56;C12N1/19;C12N15/81;C12P7/56;C12R1/84
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種葡糖淀粉酶，其特征在于，所述葡糖淀粉酶，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.17所示。

2.包含權(quán)利要求1所述葡糖淀粉酶的重組菌株。

3.如權(quán)利要求2所述的重組菌株，其特征在于，表達(dá)宿主菌是米根霉、釀酒酵母、畢赤酵母、地衣芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、解淀粉芽胞桿菌、凝結(jié)芽胞桿菌、大腸桿菌或谷氨酸棒桿菌。

4.如權(quán)利要求3所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌的表達(dá)宿主為畢赤酵母GS115，表達(dá)載體為質(zhì)粒pPIC9K。

5.權(quán)利要求1所述葡糖淀粉酶的發(fā)酵制備方法，其特征在于，具體如下：

（1）接種：按照2-15%接種量接種包含所述葡糖淀粉酶的重組菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基中添加微量元素后開始發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28-40℃，pH維持4.0-8.0，DO維持20%以上；

（2）菌體生長(zhǎng)階段：菌體生長(zhǎng)約10-28 h后，DO快速上升，隨即進(jìn)入補(bǔ)料生長(zhǎng)階段；

（3））補(bǔ)料生長(zhǎng)階段：流加10-60%甘油，初始流加速度為1.0-8.0 mL/min，當(dāng)DO低于20%時(shí)停止流加；待甘油再次耗盡，DO快速上升后，使菌體保持饑餓狀態(tài)0.5-3.0 h，然后進(jìn)入誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段；

（4）誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段：流加甲醇；初始流加速率為1.0-4.5 mL/min；當(dāng)DO低于20%時(shí)停止流加；待甲醇耗盡，DO快速上升后，重新開始流加，流加速率提高至2.5-8.0 mL/min；1-5 h后流加甲醇速率提高至5.0-15.5 mL/min，誘導(dǎo)70-120 h后發(fā)酵結(jié)束。

6.權(quán)利要求5所述葡糖淀粉酶的發(fā)酵制備方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：85%磷酸26.70 mL/L，CaSO₄·2H₂O1.18g/L，K₂SO₄18.20 g/L，MgSO₄7.27 g/L，KOH4.13 g/L，甘油10.00-50.00 g/L，其余為水。

7.權(quán)利要求1所述葡糖淀粉酶在10~300 m³發(fā)酵體系下以淀粉液化液為原料和同步糖化并被聚合級(jí)D-乳酸或聚合級(jí)L-乳酸生產(chǎn)菌種代謝利用制備乳酸單體中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求2所述重組菌株在生產(chǎn)權(quán)利要求1所述葡糖淀粉酶中的應(yīng)用。