[發(fā)明專利]CRISPR酶以及系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810911002.4
• 申請日: 2016-06-17
• 公開（公告）號: CN109207477B
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張鋒;B·蔡澈;J·S·根特柏格;O·O·阿布德耶爾;I·斯雷梅克
• 申請（專利權(quán)）人: 布羅德研究所有限公司;麻省理工學(xué)院;哈佛大學(xué)校長及研究員協(xié)會
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/55;C12N15/90;C12N15/10;C12N15/82
• 代理公司: 北京華睿卓成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11436
• 代理人: 程淼

1.一種工程化的、非天然存在的系統(tǒng)，包含

a)Cpf1效應(yīng)蛋白，以及

b)至少一種被設(shè)計為與所述Cpf1效應(yīng)蛋白形成復(fù)合物且包含指導(dǎo)序列的工程化的指導(dǎo)多核苷酸，其中所述指導(dǎo)序列被設(shè)計為與真核細胞中的靶序列雜交，其中所述靶序列是原型間隔區(qū)相鄰基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系統(tǒng)缺乏tracr序列，所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸和Cpf1效應(yīng)蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸與Cpf1效應(yīng)蛋白的復(fù)合物不是天然存在的。

2.一種工程化的、非天然存在的系統(tǒng)，包含

a)一種或多種編碼Cpf1效應(yīng)蛋白的核苷酸序列，以及

b)一種或多種編碼至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸的核苷酸序列，所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸被設(shè)計為與所述Cpf1效應(yīng)蛋白形成復(fù)合物且包含指導(dǎo)序列，其中所述指導(dǎo)序列被設(shè)計為與真核細胞中的靶序列雜交，其中所述靶序列是原型間隔區(qū)相鄰基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系統(tǒng)缺乏tracr序列，所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸和Cpf1效應(yīng)蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸與Cpf1效應(yīng)蛋白的復(fù)合物不是天然存在的。

3.一種包含一種或多種載體的工程化的、非天然存在的載體系統(tǒng)，包含

a)可操作地連接至一種或多種編碼Cpf1效應(yīng)蛋白的核苷酸序列的第一調(diào)節(jié)元件；

b)可操作地連接至一種或多種編碼至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸的核苷酸序列的第二調(diào)節(jié)元件，所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸被設(shè)計為與所述Cpf1效應(yīng)蛋白形成復(fù)合物且包含指導(dǎo)序列，其中所述指導(dǎo)序列被設(shè)計為與真核細胞中的靶序列雜交，其中所述靶序列是原型間隔區(qū)相鄰基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系統(tǒng)缺乏tracr序列，組分(a)和(b)位于所述系統(tǒng)的相同或不同的載體上，所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸和Cpf1效應(yīng)蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸與Cpf1效應(yīng)蛋白的復(fù)合物不是天然存在的。

4.一種工程化的、非天然存在的系統(tǒng)，包含

a)Cpf1效應(yīng)蛋白，或一種或多種編碼所述Cpf1效應(yīng)蛋白的核苷酸序列，以及

b)至少一種被設(shè)計為與所述Cpf1效應(yīng)蛋白形成復(fù)合物且包含指導(dǎo)序列的工程化的指導(dǎo)多核苷酸，其中所述指導(dǎo)序列被設(shè)計為與真核細胞中的靶序列雜交，或一種或多種編碼所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸的核苷酸序列，其中所述靶序列是原型間隔區(qū)相鄰基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；

其中所述系統(tǒng)缺乏tracr序列，所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸和Cpf1效應(yīng)蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指導(dǎo)多核苷酸與Cpf1效應(yīng)蛋白的復(fù)合物不是天然存在的。

5.如權(quán)利要求4所述的系統(tǒng)，包含所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸。

6.如權(quán)利要求4所述的系統(tǒng)，包含所述一種或多種編碼所述Cpf1效應(yīng)蛋白的核苷酸序列。

7.如權(quán)利要求4所述的系統(tǒng)，包含所述Cpf1效應(yīng)蛋白。

8.如權(quán)利要求4所述的系統(tǒng)，包含所述一種或多種編碼所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸的核苷酸序列。

9.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的系統(tǒng)，其中所述至少一種工程化的指導(dǎo)多核苷酸與所述Cpf1效應(yīng)蛋白的復(fù)合物引起所述靶序列遠端切割。

10.如權(quán)利要9所述的系統(tǒng)，其中所述切割生成具有4或5-nt 5’突出端的交錯雙鏈斷裂。

11.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的系統(tǒng)，其中所述Cpf1效應(yīng)蛋白來源于圖64A或64B所列出的細菌種類。