[發明專利]新月彎胞霉中甾類11β-羥化酶及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201810902590.5
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN109097343B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 張學禮;陳晶;樊飛宇
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N1/19;C12P33/08;C12P33/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.成套蛋白質，由蛋白質A和蛋白質B組成；

所述蛋白質A為如下(A1)或(A2)所示：

(A1)氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白質；

(A2)在(A1)所限定的蛋白質的N端和/或C端連接標簽后得到的融合蛋白；

所述蛋白質B為如下(B1)或(B2)所示：

(B1)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的蛋白質；

(B2)在(B1)所限定的蛋白質的N端和/或C端連接標簽后得到的融合蛋白。

2.成套核酸分子，由核酸分子A和核酸分子B組成；

所述核酸分子A為編碼權利要求1中所述蛋白質A的核酸分子；

所述核酸分子B為編碼權利要求1中所述蛋白質B的核酸分子。

3.根據權利要求2所述的成套核酸分子，其特征在于：

所述核酸分子A為核苷酸序列如SEQ ID No.3或SEQ ID No.5所示的DNA分子；

所述核酸分子B為核苷酸序列如SEQ ID No.4或SEQ ID No.6所示的DNA分子。

4.如下生物材料中的任一種：

(c1)成套重組載體，由重組載體A和重組載體B組成；所述重組載體A為含有權利要求2或3中所述核酸分子A的重組載體；所述重組載體B為含有權利要求2或3中所述核酸分子B的重組載體；

(c3)成套表達盒，由表達盒A和表達盒B組成；所述表達盒A為含有權利要求2或3中所述核酸分子A的表達盒；所述表達盒B為含有權利要求2或3中所述核酸分子B的表達盒；

(c4)成套轉基因細胞系，由轉基因細胞系A和轉基因細胞系B組成；所述轉基因細胞系A為含有權利要求2或3中所述核酸分子A的轉基因細胞系；所述轉基因細胞系B為含有權利要求2或3中所述核酸分子B的轉基因細胞系；

(c5)成套重組菌，由重組菌A和重組菌B組成；所述重組菌A為含有權利要求2或3中所述核酸分子A的重組菌；所述重組菌B為含有權利要求2或3中所述核酸分子B的重組菌。

5.一種構建用于生產氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇的工程菌的方法，包括如下步驟：對酵母菌進行改造，使其表達權利要求1所述成套蛋白質，改造后的酵母菌即為用于生產氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇的工程菌。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：將權利要求2或3所述成套核酸分子導入所述酵母菌，得到表達權利要求1所述成套蛋白質的重組酵母菌，即為所述工程菌。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述成套核酸分子是通過權利要求4中所述成套重組載體或所述成套表達盒的形式導入所述酵母菌中的。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述成套核酸分子被整合到所述酵母菌的基因組的Gal7位點或者rDNA位點處。

9.利用權利要求5-8中任一所述方法制備得到的工程菌。

10.權利要求1所述成套蛋白質或權利要求2或3所述成套核酸分子或權利要求4所述生物材料或權利要求9所述工程菌在如下任一中的應用：

(A)制備氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇；

(B)催化甾體激素類物質進行11位β羥基化和/或14位α羥基化。

11.一種制備氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇的方法，為全細胞催化法或酶法；

所述全細胞催化法包括如下步驟：對權利要求9所述工程菌進行發酵培養，收集菌體后加入底物，進行催化反應，反應產物中即含有氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇；所述底物為能夠被甾類11β-羥化酶催化生成氫化可的松和/或能夠被甾類14α-羥化酶催化生成14α-羥化皮質醇的物質；

所述酶法包括如下步驟：從權利要求9所述工程菌中提取具有甾類11β-羥化酶和/或14α-羥化酶活性的物質，然后以粗酶液、粗酶液凍干粉或純酶的形式催化底物生成氫化可的松和/或14α-羥化皮質醇；所述底物為能夠被甾類11β-羥化酶催化生成氫化可的松和/或能夠被甾類14α-羥化酶催化生成14α-羥化皮質醇的物質。