[發明專利]一種造血干細胞凍存液及其制備方法和使用方法

在審

• 申請號: 201810901210.6
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN110810397A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 黃亞非;代建波;余昆洪;李撿平
• 申請（專利權）人: 湖北省生命源干細胞有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉江煬

本發明涉及一種造血干細胞凍存液及其制備方法和使用方法，包括卵磷脂、卵清蛋白、肌球蛋白、血小板裂解物和緩沖液；其中，每100ml所述凍存液中，所述卵磷脂的質量范圍為1g至4g，所述卵清蛋白的質量范圍為0.8g至1.5g，所述肌球蛋白的質量范圍為0.8g至1.5g，所述血小板裂解物的質量至少為所述肌球蛋白質量的7.5倍，余量為所述緩沖液。本發明的有益效果是：本發明解決了傳統細胞凍存液成分的毒副作用、細胞凍存存活率低的問題，既通過改變細胞內外電解質平衡，又通過增強細胞膜張力、武裝細胞膜結構，提高細胞在凍存時的存活率。

技術領域

本發明涉及造血干細胞凍存技術領域，尤其涉及一種造血干細胞凍存液及其制備方法和使用方法。

背景技術

凍存液是指可以保護細胞免受冷凍損傷的物質，在細胞懸液中加入凍存液可保護細胞免受溶液損傷和冰晶損傷，還可以通過在細胞內外維持一定的摩爾濃度，降低細胞內外未結冰溶液中電解質的濃度，從而使細胞免受溶質的損傷。

傳統的細胞凍存液在-80℃冰箱保存時，都是加入低分子或者高分子化學物，通過改變細胞內外電解質以及滲透壓的平衡來穩定細胞在低溫保存時的細胞存活率；如，常規細胞凍存液都是加入10％二甲基亞砜和白蛋白、羥乙基淀粉組合物，而二甲基亞砜等一些低分子物質具有細胞毒性以及其他方面的毒副作用，凍存細胞存活率不是很高，整體來看，傳統細胞凍存保護液在細胞凍存方面存在許多缺陷。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的缺陷，提供一種造血干細胞凍存液及其制備方法和使用方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

依據本發明的一個方面，提供一種造血干細胞凍存液，包括卵磷脂、卵清蛋白、肌球蛋白、血小板裂解物和緩沖液；

其中，每100ml所述凍存液中，所述卵磷脂的質量范圍為1g至4g，所述卵清蛋白的質量范圍為0.8g至1.5g，所述肌球蛋白的質量范圍為0.8g至1.5g，所述血小板裂解物的質量至少為所述肌球蛋白質量的7.5倍，余量為所述緩沖液。

本發明的有益效果是：肌球蛋白重鏈環抱能將卵清蛋白運輸進細胞內，使卵清蛋白提前與水分子結合而改變細胞內粘度，從而在降溫時阻止冰晶的形成，另外，肌球蛋白與卵磷脂共同作用能夠增強細胞膜的張力和抗壓力，從而使得細胞不容易被冰晶刺破，從而使得細胞凍存時不需要程控降溫，可直接放入-80℃冰箱中凍存，操作方便；血小板裂解物能夠為肌球蛋白的運輸提供需要的ATP和營養物質，還與緩沖液共同作用調節電解質平衡；本發明解決了傳統細胞凍存液成分的毒副作用、細胞凍存存活率低的問題，既通過改變細胞內外電解質平衡，又通過增強細胞膜張力、武裝細胞膜結構，提高細胞在凍存時的存活率。

在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。

進一步：每100ml所述凍存液中，所述卵磷脂和所述肌球蛋白的質量比范圍為4:1至1:1，所述卵清蛋白和所述肌球蛋白的質量比范圍為8:10至11:10。

進一步：每100ml所述凍存液中，所述卵磷脂和所述肌球蛋白的質量比為3:1。

上述進一步方案的有益效果是：提高卵磷脂和肌球蛋白的配合作用效率，盡可能減少冰晶的形成，使得細胞凍存時不需要程控降溫，操作方便。

進一步：每100ml所述凍存液中，所述卵清蛋白和所述肌球蛋白的質量比為1:1。

上述進一步方案的有益效果是：提高卵清蛋白和肌球蛋白共同作用的效率，盡可能的增強細胞膜的張力和抗壓力，避免細胞被冰晶刺破，提高細胞存活率。

進一步：所述緩沖液為勃脈力A注射液或者PBS緩沖液。

上述進一步方案的有益效果是：起到定容和調節電解質平衡的作用。