[發明專利]用于鰻弧菌特異性識別的ssDNA核酸適配體及篩選與應用

有效

• 申請號: 201810897903.2
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN109055381B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 呂明生;王淑軍;谷利德;房耀維;劉姝;陳麗;任偉;閆婉麗
• 申請（專利權）人: 江蘇海洋大學;江蘇省海洋資源開發研究院（連云港）
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/569
• 代理公司: 連云港潤知專利代理事務所 32255
• 代理人: 劉喜蓮

本發明是一種用于鰻弧菌（Vibrio anguillarum）特異性識別的ssDNA核酸適配體，所述核酸適配體的核苷酸序列為Apt?Va01和Apt?Va02中所示的DNA片段的核苷酸序列。本發明還詳細闡述了對該核酸適配體的篩選方法。本發明提供了一條特異性強，親和力高，檢測限低的鰻弧菌核酸適配體，能夠快速的對鰻弧菌菌體細胞進行檢測，可被應用于食品加工、水產養殖、醫學診斷、環境檢測等過程中鰻弧菌的快速檢測。

技術領域

本發明屬水產病害微生物檢測技術領域，具體涉及一種可用于特異性檢測鰻弧菌（V. anguillarum）的ssDNA核酸適配體，本發明還涉及該ssDNA核酸適配體的篩選與應用。

背景技術

鰻弧菌（V. anguillarum）是水產養殖中危害最為嚴重的致病菌株之一。當水產養殖動物受到環境改變、應激反應或受傷等條件下，鰻弧菌可引發疾病的產生。該菌可感染鮭魚、虹鱒、鰻鱺、香魚、鱸魚、鱈魚、大菱鲆、牙鲆、黃魚等魚類。研究報道，部分感染鰻弧菌的水產動物體表最初出現局部褪色，鰭條、鰭基部及鰓骨下部充血發紅，肛門紅腫，繼而肌肉組織有彌撒性或點狀出血，體表發黑，鰭部出現潰爛，解剖檢驗時有明顯的黃色粘稠腹水，腸粘膜組織腐爛脫落，部分魚肝臟壞死。感染鰻弧菌后的水產動物表現出病情逐步加重的癥狀，并最終引起死亡。早期、快速診斷對疾病控制與治療很重要。

上世紀九十年代出現的系統進化配體指數富集技術(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment, SLEXE)使核酸適配體的篩選研究工作得到了進一步發展。采用SELEX技術可從一個隨機寡核苷酸文庫（10¹³~10¹⁵）中篩選到的精準識別特定靶標的高特異性和親和性的適配體（aptamers），這些適配體可被廣泛應用于生物制藥、分子生物學、微生物學、醫學診斷治療、環境檢測等研究領域。適配體與其他生物分子相比擁有很多優良特性：易合成、易修飾、穩定性好、靈敏度高、靶標范圍廣、特異性強、pH范圍廣、免疫原性低等。

以鰻弧菌作為靶標的核酸適配體的篩選并進行快速檢測具有重要意義。利用SELEX技術篩選得到針對于鰻弧菌菌體細胞的高特異性和親和力的核酸適配體，可以用于環境檢測和鰻弧菌所引發的疾病病原的快速診斷。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種新的用于鰻弧菌快速檢測的ssDNA核酸適配體。

本發明的另一個目的是提供了前述ssDNA核酸適配體的篩選方法。

本發明的另一個目的是提供了前述ssDNA核酸適配體檢測鰻弧菌的用途。

本發明的目的是通過以下的技術方案來實現的。本發明是一種用于鰻弧菌（Vibrio anguillarum）特異性識別的ssDNA核酸適配體，其特點是：所述核酸適配體的核苷酸序列為Apt-Va01和Apt-Va02中所示的DNA片段的核苷酸序列：

Apt-Va01：5’-CTGCAGAATTCTAATACGAGTCACTATAGGAAGATGGCGAAACATCTTATCGAATTGTAGACGACGCTTTAGGTCCCTCTTGACGCGCAGTATGATACCTGTATTACCGTGGCGTGCATGTCTGCTGTTAGTGACGGTAAGCTTGGCAC -3’；

Apt-Va02：5’-CTGCAGAATTCTAATACGAGTCACTATAGGAAGATGGCGAAACATCTTAGTAAGTCTTCTCTTCGGAACATTATCCAAAAATTGGATATCCTACTCTTATGGGTGATAGATGTGTATGTACGTCTAGATAGTGACGGTAAGCTTGGCAC -3’。