[發明專利]一種CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系的鑒定方法

有效

• 申請號: 201810896148.6
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108950047B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 孫彬妹;代風玲;劉任堅;劉少群;肖熙
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 廣州市時代知識產權代理事務所(普通合伙) 44438
• 代理人: 盧浩

本發明提供一種CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：S1.選取待測茶樹品系，取茶樹品系茶葉的頂芽、第二葉、第三葉、老葉；S2.分別提取茶葉的頂芽、第二葉、第三葉、老葉的RNA序列；S3.將提取的RNA序列分別反轉錄成cDNA；S4.以cDNA為模板，通過特異性引物對進行PCR擴增；S5.對PCR擴增的產物進行測序，檢測分析CsTTG1在茶葉茸毛生長發育線性關系中是否具有特異性表達。本發明可為深化對茸毛形成分子機理的認識，同時也為指導茶樹的遺傳育種提供重要的理論依據。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系的鑒定方法。

背景技術

茶樹的嫩葉是制茶的主要原料，特別是早春時期采摘的茶葉品質極佳，茶樹嫩芽茸毛中含有更高的氨基酸和較少的多酚類物質，賦予茶湯更多鮮味和更少澀味。茶葉茸毛的數量和質量是評定茶樹品種經濟性的主要性狀之一，茶樹芽葉的茸毛越多，表明茶樹芽葉越嫩，同時其質量也越好。

茶葉中的茸毛可以提高茶葉外形品質。許多名茶包括紅茶、白茶等在制作過程中，都要求茶毫能顯露出來，以便提高干茶外形品質和茶湯口感品質，如高級祁紅、滇紅、黃山毛峰、白毫銀針、信陽毛尖等。高品味的名優茶中富含茸毛，茸毛能增加茶葉的鮮甜并減少苦澀，而茶葉的鮮甜主要來源于游離的氨基酸如天冬氨酸和絲氨酸。茶葉茸毛很大程度上積極影響口感品質的形成，在加工過程中，由于殺青及揉捻的外力作用，鮮葉中的部分茸毛會發生脫落，沾附在茶葉表面。沖泡之后，附在茶葉中的茶毫會完全溶在茶湯中，其中的氨基酸和其它成分會融進茶湯中，增加了茶湯的香氣和滋味，提高了茶湯的口感品質。

現有研究采用SMART-RACE技術克隆了茶樹Dof（DNAbindingwithonefinger）基因CsCDF1的全長cDNA序列，并利用在線生物信息學軟件對其進行了分析。采用實時熒光定量PCR分析該Dof基因在茶樹不同組織間的表達差異和晝夜表達規律，及其在氮饑餓處理2周后對不同濃度氮素誘導的響應。該cDNA序列全長1606bp，包含1個編碼464個氨基酸的完整開放閱讀框，含有高度保守的DOF結構域，推導的蛋白分子量為50.8kDa，理論等電點（PI）為5.52；其編碼的蛋白序列與茸毛煙草、馬鈴薯和美花煙草的CDF蛋白（Cyclingdoffactor）相似性分別為69%、67%、68%。系統發育分析結果表明，該基因編碼的氨基酸序列與擬南芥CDF蛋白聚為一類，因此將其命名為CsCDF1；CsCDF1在3個不同茶樹品種根系中的表達量均高于一芽二葉和成熟葉；在一天中，該基因的表達呈現出晝夜節律變化；在氮饑餓后重新供氮，不同組織中該基因對不同濃度氮素的響應均為上調。已有研究發現，發現茶樹中和調控擬南芥表皮毛生長發育相關的同源基因AtTTG1表達模式相關，并命名為CsTTG1。

但是關于影響茶葉茸毛生產發育的基因以及其與茶葉茸毛生長發育線性關系尚未有研究。因此，鑒定CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系，可以為CsTTG1基因的表達模式與茸毛發育的關系，通過對不同品種間茸毛密度分布特征的研究，劃分品種茸毛等級；研究CsTTG1在品種間的表達差異，分析CsTTG1基因表達模式與茸毛分布特征的關系；并以模式植物的遺傳轉化來驗證CsTTG1基因功能。不僅深化對茸毛形成分子機理的認識，同時也為指導茶樹的遺傳育種提供重要的理論依據。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系的鑒定方法。本發明可為深化對茸毛形成分子機理的認識，同時也為指導茶樹的遺傳育種提供重要的理論依據。

本發明的技術方案為：一種CsTTG1基因與茶葉茸毛生長發育線性關系的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：