[發(fā)明專利]一種通過LC-MS檢測核酸表觀遺傳修飾的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810896131.0
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108872459B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發(fā)明（設計）人: 谷曉峰;張倩
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院生物技術研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發(fā)明公開了一種通過LC?MS檢測核酸表觀遺傳修飾的方法，具體涉及一種檢測核糖核酸(RNA)中甲基化修飾的核糖核苷酸的豐度的方法和一種檢測脫氧核糖核酸(DNA)中甲基化修飾的脫氧核糖核苷酸的豐度的方法。包括如下步驟：(1)提取生物樣本的核酸，進行單核苷酸制備，然后進行去磷酸化，然后純化單核苷酸，得到上機樣本；(2)采用液相色譜?質譜聯用儀對上機樣本進行檢測，獲得豐度結果。本發(fā)明對于核酸表觀遺傳修飾的研究領域具有重大的應用推廣價值。

技術領域

本發(fā)明涉及一種通過LC-MS檢測核酸表觀遺傳修飾的方法，具體涉及一種檢測核糖核酸(RNA)中甲基化修飾的核糖核苷酸的豐度的方法和一種檢測脫氧核糖核酸(DNA)中甲基化修飾的脫氧核糖核苷酸的豐度的方法。

背景技術

表型(phenotype)，又稱性狀，是指一個生物體(或細胞)可以觀察到的性狀或特征，是特定的基因型與環(huán)境相互作用的結果。包括個體形態(tài)、功能等各方面的表現，如身高、膚色、血型、酶活力、藥物耐受力乃至性格等。經典遺傳學(genetics)是指由于基因序列改變(如基因突變等)所引起的基因功能的變化，從而導致表型發(fā)生可遺傳的改變。表觀遺傳學是指在不改變核DNA序列的前提下影響個體發(fā)育并且是可遺傳的，其研究主要集中于DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質重塑、非編碼RNA等修飾。這些表觀遺傳學修飾相互作用以調節(jié)基因的表達，控制表型，是維持機體內環(huán)境穩(wěn)定所必需的。

一直以來人們都認為基因組DNA決定著生物體的全部表型，但逐漸發(fā)現有些現象無法用經典遺傳學理論解釋，比如基因完全相同的同卵雙生雙胞胎在同樣的環(huán)境中長大后，他們在性格、健康等方面會有較大的差異。這說明在DNA序列沒有發(fā)生變化的情況下，生物體的一些表型卻發(fā)生了改變。因此，英國科學家Waddington最早提出了表觀遺傳的概念，它是在研究與經典遺傳學不相符的許多生命現象過程中逐步發(fā)展起來的一門前沿學科，是對經典遺傳學的補充和進一步發(fā)展。現在人們認為，基因組含有兩類遺傳信息，一類是傳統意義上的遺傳信息，即基因組DNA序列所提供的遺傳信息，另一類則是表觀遺傳學信息，即基因組DNA的修飾，它提供了何時、何地、以何種方式去應用DNA遺傳信息的指令。生物體正常功能的維持是這兩種信息相互作用的、保持平衡的結果，因此，表觀遺傳學是生命科學中一個普遍而又及其重要的研究領域，對基因的表達、調控、遺傳有重要作用。