[發明專利]基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫構建用的探針組合物、試劑盒及應用在審
| 申請號： | 201810895125.3 | 申請日： | 2018-08-08 |
| 公開（公告）號： | CN108950691A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 張巍 | 申請（專利權）人： | 廣州嘉檢醫學檢測有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 林青中 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 外顯子捕獲 外顯子 基因文庫構建 探針組合物 遺傳性疾病 捕獲探針 保守區域 試劑盒 文庫 捕獲 內含子區域 基因組DNA 基因片段 基因數據 密度調整 目標區域 市售試劑 突變類型 均一性 內含子 子序列 構建 探針 成功率 遺漏 應用 分類 基因 覆蓋 保證 發現 研究 | ||
1.一種基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫構建用的探針組合物，其特征在于，包括序列分別同下列各染色體上相應位點之間的序列完全一致的多條寡核苷酸探針：
參考基因組為hg19，各所述寡核苷酸探針的5’端連接有第一連接標記物。
2.一種基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫構建用的試劑盒，其特征在于，包括捕獲磁珠和如權利要求1所述的探針組合物，所述捕獲磁珠上固定有能夠與所述第一連接標記物反應結合的第二連接標記物。
3.如權利要求2所述的基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫構建用的試劑盒，其特征在于，所述第一連接標記物為生物素，所述第二連接標記物為親和素或鏈霉親和素。
4.如權利要求2或3所述的基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫構建用的試劑盒，其特征在于，還包括DNA末端修復試劑、加A試劑、加接頭試劑、LM-PCR試劑、雜交反應試劑和磁珠捕獲試劑中的至少一種。
5.如權利要求1所述的探針組合物或如權利要求2～4中任一項所述的試劑盒在構建基于外顯子捕獲的遺傳性疾病基因文庫中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，文庫的構建過程包括如下步驟：
提取人體DNA樣本，將其打碎成DNA片段；
對打碎的DNA片段依次進行末端修復、加A和加接頭處理；
對加接頭處理后的DNA片段進行捕獲前的LM-PCR處理；
使用所述探針組合物與LM-PCR產物中的目的DNA片段雜交，使用與該探針組合物配合使用的捕獲磁珠捕獲目的DNA片段；
將目的DNA片段從所述捕獲磁珠上洗脫下來，并對捕獲的目的DNA片段進行捕獲后的LM-PCR處理。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述DNA片段的長度不大于500bp。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述DNA片段的長度為340bp～360bp。
9.如權利要求6～8中任一項所述的應用，其特征在于，所述使用所述探針組合物與LM-PCR產物中的目的DNA片段雜交之前還包括向LM-PCR產物中加入COT DNA，以用于阻斷非特異性雜交的步驟。
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