[發明專利]一種福爾馬林浸泡組織DNA提取試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 201810885098.1
• 申請日: 2018-08-06
• 公開（公告）號: CN108707602A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發明（設計）人: 林小靜;王海波;侯軍艷;辛琳
• 申請（專利權）人: 臻和（北京）科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種福爾馬林浸泡組織DNA提取試劑盒，其特征在于，包括以下組分：SDS緩沖液、結合緩沖液、蛋白酶K、DNA純化磁珠、第一洗液、第二洗液和洗脫液；

所述SDS緩沖液的濃度為0.03～0.04mol/L；

所述結合緩沖液包括3.0～3.5mol/L GuHCl，0.5～1.0mol/L NaCl，0.01～0.02mol/LSDS，0.08～0.15mol/L Triton X-100，1.25～1.30mol/LEDTA和0.8～1.2mol/L Tris-HCl；

所述第一洗液包括0.60～0.65mol/L GuHCl，0.40～0.50mol/L NaCl，和8.0～8.5mmol/L Tween 20；

所述第二洗液包括0.8～1.2mol/L Tris和體積分數為20～30％乙醇；

所述洗脫液為0.008～0.012mol/L Tris溶液。

2.根據權利要求1所述的福爾馬林浸泡組織DNA提取試劑盒，其特征在于，所述SDS緩沖液的濃度為0.035mol/L；

所述結合緩沖液包括3.3mol/L GuHCl，0.75mol/L NaCl，0.014mol/L SDS，0.11mol/LTriton X-100，1.28mol/LEDTA和1.0mol/L Tris-HCl；

所述第一洗液包括0.63mol/L GuHCl，0.45mol/L NaCl和8.22mmol/L Tween 20；

所述第二洗液包括1.0mol/L Tris和體積分數為26％乙醇；

所述洗脫液為0.01mol/LTris溶液。

3.根據權利要求1或2所述的福爾馬林浸泡組織DNA提取試劑盒，其特征在于，還包括PBS緩沖液和異丙醇。

4.利用權利要求1～3任意一項所述試劑盒提取福爾馬林浸泡組織DNA的方法，包括以下步驟：

1)將福爾馬林浸泡組織與SDS緩沖液混合后超聲破碎獲得裂解液；

2)將所述裂解液與蛋白酶K混合后，54℃～58℃消化50～70min獲得消化液；

3)將所述消化液于78℃～82℃二次消化40～80min，冷卻、固液分離收集液相組分為待提取液；

4)將所述待提取液、PBS緩沖液、結合緩沖液、DNA純化磁珠和異丙醇混合，于54～56℃加熱10～15min后，磁分離收集結合DNA的磁珠；

5)依次用第一洗液和第二洗液漂洗所述結合DNA的磁珠；將漂洗后的結合DNA磁珠進行3～5min的自然風干獲得干燥磁珠；

6)將所述干燥磁珠與洗脫液混合于54～56℃加熱8～12min后，磁分離，收集液相組分為福爾馬林浸泡組織DNA。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述福爾馬林浸泡組織為直徑0.8～1.2mm的顆粒；所述福爾馬林浸泡組織與SDS緩沖液的質量體積比為(0.3～1)g:10ml。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述超聲破碎的負載比為18～22％；所述超聲破碎的瞬間最大功率為70～80w；所述超聲破碎每個脈沖的循環數為180～220；所述超聲破碎的時間為120～360s；所述超聲破碎的溫度為18～26℃。

7.根據權利要求4或6所述的方法，其特征在于，所述裂解液與蛋白酶K的體積比為(4～6)：1。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述待提取液、PBS緩沖液、結合緩沖液、DNA純化磁珠和異丙醇的體積比優選為(100～140)：(350～450)：(450～550)：(80～160)：(35～45)。

9.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一洗液與DNA純化磁珠的體積比為15：(2～4)；所述第二洗液與DNA純化磁珠的體積比為15：(2～4)。

10.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脫液與DNA純化磁珠的體積比為5：(4～8)。