[發明專利]一種無血清細胞培養基及其用途

有效

• 申請號: 201810875741.2
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN109055309B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 丘力功;李潤明;邱壯偉;符美娟;趙海蓮;秦劍;郝宇
• 申請（專利權）人: 廣州白云山拜迪生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;C12N5/0783
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;宋靜娜

本發明公開了一種無血清細胞培養基，包含以下組分：基礎培養基、NaHCO₃、L型植物血球凝集素、復合氨基酸、檸檬酸鐵、重組人胰島素和抗氧化劑。本發明還公開了所述無血清細胞培養基在培養外周血淋巴細胞中的用途。本發明無血清細胞培養基中添加了抗氧化劑，可用于培養外周血淋巴細胞，尤其是離心管靜置培養的外周血淋巴細胞，能顯著改進離心管裝培養基的培養效果，滿足現有臨床檢測對離心管培養基的要求。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種無血清細胞培養基及其用途。

背景技術

近年來，外周血染色體核型檢查分析有向第三方檢測平臺集中的趨勢。規模化、自動化的細胞染色體制片技術已在第三方檢測平臺出現，以適應不斷增加的檢驗樣本。而用離心管裝培養基進行培養省去了傳統的西林瓶培養后液體轉移至離心管進行細胞染色體制片的步驟，避免了出錯和交叉污染的可能，適合外周血的自動化、規模化細胞制片的發展趨勢。

現市場上用離心管裝的淋巴細胞培養基和傳統的西林瓶裝培養基在配方上并無區別，僅僅是從西林瓶到離心管之間劑型的替代。雖然細胞培養基配方未發生改變，但綜合臨床單位調研結果和實際試配檢測的結果卻表明，現有的用于核型分析的西林瓶裝的培養基公開配方，無論是傳統的含血清培養基還是無血清培養基，直接用于離心管培養的效果都顯著不如西林瓶裝的培養效果，在細胞轉化率或分裂相指數等質量指標方面達不到臨床單位要求。

一般認為離心管培養基效果不理想的原因主要為：為了便于在細胞培養后原位進行細胞固定和染色體制備，采用的離心管規格一般為15ML底部錐型的刻度離心管。與西林瓶相對較大的底面積相比，在這種離心管培養時的細胞會沉積在錐型管底有限的空間。由于細胞堆積成團，障礙了培養基中營養物質的傳質和吸收，最終抑制了細胞的增殖。相應的改進的措施是將離心管橫臥的方式(錐型管底最低點至管蓋中心的沿長線與水平面呈0-15度夾角)進行培養，通過橫臥的方式增加沉降后的細胞接觸管壁的面積，以減少細胞堆積的程度；或采取培養過程中一定間隔或持續震蕩混勻的方式避免細胞堆積于管底。我們研究發現，離心管橫臥培養相比離心管垂直培養可一定程度改進效果，但細胞轉化率和分裂相指數仍低于西林瓶裝培養基的培養效果，達不到臨床檢測單位的要求。而間隔或持續搖勻雖可顯著改善離心管細胞培養效果，但卻增加了臨床檢測單位人手操作負擔(特別是樣本處理量大時)或額外的設備負擔。上述離心管培養基的效果方面的因素或使用缺陷障礙了離心管培養基代替西林瓶培養基在臨床單位的使用。

針對上述問題，有必要開發一種用于離心管靜置培養的外周血淋巴細胞培養基，并且培養效果不低于現有西林瓶裝培養基的水平。

發明內容

基于此，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種無血清細胞培養基，其可用于培養外周血淋巴細胞，尤其是離心管靜置培養的外周血淋巴細胞，能顯著改進離心管裝培養基的培養效果，滿足現有臨床檢測對離心管培養基的要求。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：一種無血清細胞培養基，包含以下組分：基礎培養基、NaHCO₃、L型植物血球凝集素、復合氨基酸、檸檬酸鐵、重組人胰島素和抗氧化劑。

優選地，所述抗氧化劑包含維生素E和還原型谷胱甘肽。

優選地，所述無血清細胞培養基包含以下濃度的組分：基礎培養基9～12g/L、NaHCO₃ 1～3g/L、L型植物血球凝集素8～13mg/L、復合氨基酸18.5～21.5ml/L、檸檬酸鐵0.8～1.2mg/L、重組人胰島素8.5～11mg/L、維生素E 0.8～1.2mg/L和還原型谷胱甘肽4～6mg/L。