[發(fā)明專利]鵝成纖維細胞培養(yǎng)基及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810868525.5
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108949672A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊金龍;戴茜茜;游斌杰
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市畜牧科學(xué)院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 石歡歡

本發(fā)明屬于未分化的脊椎動物細胞或組織培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鵝成纖維細胞培養(yǎng)基。所述鵝成纖維細胞培養(yǎng)基，包括DMEM培養(yǎng)基、鵝尿囊液提取液、胎牛血清和黃芪多糖注射液。本發(fā)明的培養(yǎng)基成本低，能夠明顯促進鵝成纖維細胞的生長增殖；采用該培養(yǎng)基培養(yǎng)鵝成纖維細胞，效率提高，且成活率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于未分化的脊椎動物細胞或組織培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鵝成纖維細胞培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

組織工程是將工程學(xué)原理和生命科學(xué)相結(jié)合，研究開發(fā)用于組織和器官修復(fù)、改善和功能維持的生物替代物（“組織工程皮膚發(fā)展現(xiàn)狀”，楊維等，中國科學(xué)：生命科學(xué)，2015年第45卷第5期，第460-470頁，公開日2015年12月31日），用于修復(fù)、維持或改善機體形態(tài)和功能的一門新興的交叉學(xué)科（“組織工程皮膚構(gòu)建的研究進展”，孫錦章等，國際外科學(xué)雜志，2006年第33卷第5期，第389-393頁，公開日2006年12月31日），屬于再生醫(yī)學(xué)范疇。臨床上對組織器官的大量需求，促進了組織工程研究及其產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展（“組織工程皮膚發(fā)展現(xiàn)狀”，楊維等，中國科學(xué)：生命科學(xué)，2015年第45卷第5期，第460-470頁，公開日2015年12月31日）。其中，組織功能皮膚是組織工程迄今為止最成功的產(chǎn)品之一，由原代培養(yǎng)的皮膚細胞和細胞外間質(zhì)（英文簡稱ECM，主要為膠原蛋白）組成，是有活性的皮膚，是應(yīng)對供體皮膚匱乏的有效策略，可避免受傷部位體液流失和感染，并可以促進細胞因子和生長因子的分泌，從而加速傷口愈合（“組織功能皮膚的現(xiàn)狀和展望”，郝文麗等，北京生物醫(yī)學(xué)工程，2016年第35卷第1期，第94-99頁，公開日2016年02月29日）。

種子細胞作為組織工程的基本要素，其黏附、增殖能力、分化程度及免疫特性是生物活性皮膚構(gòu)建過程中需重點考慮的問題。目前，用于構(gòu)建組織工程皮膚替代物的種子細胞主要有表皮細胞、成纖維細胞和干細胞等。其中，成纖維細胞的生物學(xué)作用廣泛,增殖快,黏附力強,同時因為成纖維細胞、特別是胎兒來源的成纖維細胞免疫原性低,不引起機體明顯的排斥反應(yīng),因此，成纖維細胞是目前皮膚組織工程應(yīng)用最為廣泛的種子細胞（“組織工程皮膚種子細胞的研究進展”，孫強等，感染、炎癥、修復(fù)，2008年第9卷第1期，第55-57頁，）。成纖維現(xiàn)階段，種子細胞的大規(guī)模體外培養(yǎng)是組織工程皮膚研發(fā)中需要解決的一大問題（CN103911339A，公開日2014年07月09日）。傳統(tǒng)的用于鵝成纖維細胞培養(yǎng)的細胞培養(yǎng)基要添加20％的胎牛血清，才能促進鵝成纖維細胞更好地生長，而胎牛血清價格昂貴，獲取困難，多依靠進口。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種鵝成纖維細胞培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基成本低，能夠明顯促進鵝成纖維細胞的增殖同時，能夠提高鵝成纖維細胞在體外培養(yǎng)的適應(yīng)能力，減少細胞脫落、死亡。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

鵝成纖維細胞培養(yǎng)基，包括DMEM培養(yǎng)基、鵝尿囊液提取液、胎牛血清和黃芪多糖注射液。

所述DMEM的英文全稱為dulbecco's modified eagle medium，中文譯名為改良杜氏伊格爾培養(yǎng)基，是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量。

發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，將以上培養(yǎng)基用于鵝成纖維細胞培養(yǎng)，能夠明顯促進鵝成纖維細胞增殖；同時，能夠提高鵝成纖維細胞在體外培養(yǎng)的適應(yīng)能力，減少細胞脫落、死亡。

進一步，所述鵝尿囊液提取液為孵化的鵝蛋中的尿囊液凍融后離心得到的上清液。

進一步，所述孵化的時間為9-15天。

進一步，離心的轉(zhuǎn)速為500-1000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為5-10分鐘。

進一步，以體積百分比計，配比關(guān)系為：65%-75%DMEM培養(yǎng)基、5%-15%胎牛血清、15%-25%鵝尿囊液提取液和1%-5%黃芪多糖注射液。