[發(fā)明專利]一種無血清培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810865712.8
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN108913646A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設計）人: 侯野;張乾順;邵瑞華;黃廣達;王璐;趙英杰;韓丹;張志豪;宋春雨
• 申請（專利權）人: 壹生科（深圳）有限公司;北京鼎持生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 北京方安思達知識產權代理有限公司 11472
• 代理人: 陳琳琳;武玥

本發(fā)明公開了一種無血清培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包含以下組分：DMEM/F12；以及在DMEM/F12中添加：0.6?300ng/mL生長因子、15?120μg/L激素、3?150mg/mL蛋白質、0.1?1.7g/L氨基酸及肽、6.51?13.1mg/L脂質復合物、22?220μg/L微量元素、0.5?5.9mg/L維生素。本發(fā)明涉及一種細胞培養(yǎng)基，特別是用于培養(yǎng)懸浮細胞的培養(yǎng)基，其用于重組蛋白的表達，本發(fā)明培養(yǎng)基，完全不含有血清成份；生產的抗體純度大幅度提高；該培養(yǎng)基同時具有高擴增速度及高抗體表達能力；該培養(yǎng)基能長時間保持細胞活性，細胞培養(yǎng)時間大大延長，可以大大延長生產時間，提高抗體產量。

技術領域

本發(fā)明涉及一種細胞無血清培養(yǎng)基，屬于細胞培養(yǎng)技術領域。

背景技術

無血清培養(yǎng)基是指不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基，可以應用于培養(yǎng)哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、犬腎細胞(MDCK)、猴腎細胞(Vero)、乳倉鼠腎細胞(BHK)等。

目前已廣泛采用細胞培養(yǎng)來生產多種生物活性制品，如病毒疫苗、單克隆抗體、非抗體免疫調節(jié)劑、多肽生長因子、激素、酶、腫瘤特異性抗原等。這些產品可通過正常的或轉化的和經基因工程改造的細胞產生。

以往，用于細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基需要添加血清，作為生產生物活性產品的所有哺乳動物細胞系生長和維持所需的通用營養(yǎng)物質。血清含有激素、生長因子、載體蛋白質、粘附和擴散因子、營養(yǎng)成分、微量元素等。培養(yǎng)基通常含有高達約10％的動物血清，例如胎牛血清(FBS)，也稱為胎犢血清(FCS)。

雖然廣泛采用了血清，但是其有許多缺點，如產物純化難度加大、來源限制、批次間生物活性差異(導致過程不穩(wěn)定)、生物污染(如瘋牛病)等。因此，研究含已知成分的無血清培養(yǎng)基成為細胞培養(yǎng)領域中一項重要工作。

目前，市售的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞擴增倍數(shù)低、存活時間短、活性低、產量不高、且抗體純度低，不能滿足臨床應用的問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的不足，開發(fā)出一種高效安全穩(wěn)定的無血清培養(yǎng)基。

為了實現(xiàn)上述要求和目的，本發(fā)明所采用的技術方案如下：

一種無血清培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包含以下組分：

DMEM/F12；

以及在DMEM/F12中添加：

0.6-300ng/mL生長因子、15-120μg/L激素、3-150mg/mL蛋白質、0.1-1.7g/L氨基酸及肽、6.51-13.1mg/L脂質復合物、22-220μg/L微量元素、0.5-5.9mg/L維生素。

本發(fā)明中，在DMEM/F12中添加0.6-300ng/mL生長因子表示的是在1mLDMEM/F12中添加0.6-300ng的生長因子，其他添加組分所表達的含義與此相同，即μg/L、g/L、mg/L中的L均是指作為添加基礎的DMEM/F12的量。

優(yōu)選地，所述的生長因子包括如下組分及含量：

成纖維細胞生長因子0.1-50ng/mL、重組人表皮細胞生長因子(EGF)0.1-50ng/mL、神經生長因子0.1-50ng/mL、轉化生長因子0.1-50ng/mL、白血病抑制因子0.1-50ng/mL、胰島素樣生長因子-1 0.1-50ng/mL。

優(yōu)選地，所述的激素包括如下組分及含量：

氫化可的松12-60μg/L、胰島素2-20μg/L、孕酮0-20μg/L、地塞米松1-20μg/L。

優(yōu)選地，所述的蛋白質包括如下組分及含量：