[發明專利]細胞內檢測生物分子間相互作用及其調控因子的方法與所用試劑

有效

• 申請號: 201810862836.0
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN110794129B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 李丕龍;王靜;張冠偉
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;魏少偉

1.檢測細胞內生物分子間相互作用的方法，待測生物分子名稱為X和X_L，所述X為蛋白質，所述X_L為蛋白質，所述方法包括U1)和U2)：

U1)連接名稱為R的生物分子和所述X，將得到的重組分子記為R-X；所述R含有固有無序蛋白/區域；連接所述X_L與名稱為J的報告基團，將得到的重組分子記為X_L-J；

U2)將所述R-X與所述X_L-J導入生物細胞中，得到重組細胞，檢測所述重組細胞中所述J的信號是否在所述固有無序蛋白/區域所形成的第二相中聚集，確定所述X和所述X_L間是否具有相互作用：如所述J的信號在所述第二相中聚集，所述X和所述X_L間具有或候選具有相互作用；如所述J的信號在所述第二相中沒有聚集，所述X和所述X_L間不具有或候選不具有相互作用。

2.鑒定細胞內生物分子間互作調控因子的方法，待測生物分子名稱為X和X_L，所述X為蛋白質，所述X_L為蛋白質，所述X和所述X_L間具有相互作用，所述方法包括V1)和V2)：

V1)連接名稱為R的生物分子和所述X，將得到的重組分子記為R-X；所述R含有固有無序蛋白/區域；連接所述X_L與名稱為J的報告基團，將得到的重組分子記為X_L-J；

V2)將所述R-X與所述X_L-J導入生物細胞中，得到重組細胞；培養所述重組細胞，向所述重組細胞的培養體系中添加待測調控因子，得到待測體系；培養所述重組細胞，得到對照體系；然后檢測所述待測體系和所述對照體系中所述重組細胞中所述J的信號在所述固有無序蛋白/區域所形成的第二相中的強度，確定所述待測調控因子對所述X和所述X_L間的相互作用是否具有調控作用：如所述J的信號在所述待測體系的第二相中高于所述對照體系，所述待測調控因子對所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有促進作用；如所述J的信號在所述待測體系的第二相中等于所述對照體系，所述待測調控因子對所述X和所述X_L間的相互作用不具有或候選不具有調控作用；如所述J的信號在所述待測體系的第二相中低于于所述對照體系，所述待測調控因子對所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有抑制作用。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述R還含有名稱為K的報告基團，所述K不同于所述J。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述J和所述K為熒光報告基團。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述熒光報告基團為熒光蛋白質。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述固有無序蛋白/區域為H1)或H2)或H3)：

H1)氨基酸序列是序列1的第258-772位所示的蛋白質；

H2)將序列表中序列1的第258-772位所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；

H3)在H1)或H2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述R中所述K和所述固有無序蛋白/區域通過連接區或化學鍵相連。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述X_L-J中所述X_L和所述J通過連接區或化學鍵相連；

和/或，所述R-X中所述R和所述X通過所述連接區或化學鍵相連。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述連接區為(Gly-Gly-Ser)_n或含有(Gly-Gly-Ser)_n的多肽，n為大于等于2的自然數。