[發明專利]超大孔徑層析介質在純化病毒顆粒的應用

在審

• 申請號: 201810861772.2
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN108949702A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 劉勁松;林生躍;金百勝;江必旺;陳榮姬
• 申請（專利權）人: 蘇州納微科技股份有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

本發明提供了超大孔徑層析介質在純化病毒顆粒的應用，所述超大孔徑層析介質帶有離子交換功能基團，所述超大孔徑層析介質的粒徑≥40μm。超大孔徑微球的離子交換層析樹脂比現有技術的類似層析介質具有顯著提高的病毒顆粒結合載量和結合速度，從而能提高吸附一洗脫層析模式病毒顆粒純化效率，同樣也可以提高流穿層析模式時病毒去除效率。

技術領域

本發明屬于純化領域，具體涉及一種超大孔徑層析介質在純化病毒顆粒的應用。

背景技術

病毒顆粒純化在基因治療以及疫苗開發和生產領域不可缺少的環節。除病毒純化外，病毒和病毒樣顆粒的去除是治療性蛋白質下游加工中的重要問題。盡管有多種分離技術應用于病毒純化與去除，層析分離法已被證明為潛在的比傳統的密度梯度超速離心法更為有效的手段。吸附-洗脫(bind-elute)模式的層析分離在病毒載體及疫苗純化工藝中得到廣泛應用，而流穿模式(flow-through)的層析方法則成為治療性蛋白質(包括單克隆抗體和融合重組蛋白)下游生產工藝中去除病毒的普遍選擇。

純化用層析介質一般由多孔微球樹脂組成，主要有水凝膠類樹脂(比如瓊脂糖類)或者合成聚合物類樹脂(比如聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯等)。

多糖類微球類層析填料，是目前國內外最常用的生化分離介質。瓊脂糖分子不帶電荷，具有良好的親水性，能夠提供生物兼容的界面環境；分子中豐富的羥基可被繼續修飾，形成離子交換、疏水、親和等多種不同類型的介質。但是，瓊脂糖介質作為一種軟凝膠微球，介質孔徑一般小于50nm，介質球含水量通常在90％以上，在高壓、高流速下會發生變形，嚴重影響分離效率。

多孔的聚合物微球，可以以單體為原料合成，通常由懸浮聚合形成剛性的微球結構，能夠承受較高的流速與壓力。通過調控聚合單體和聚合工藝，可有效控制聚合物微球的孔道結構與界面特征?？讖椒秶话銥?0-30nm。用于層析分離時，由于孔徑較小，流動相在孔道內的傳質過程主要依靠分子擴散完成，傳質速度慢；不利于分離大分子的生化技術產品?，F有技術的純化用層析介質通?？讖皆谝韵隆＠?，目前市場上層析介質知名品牌的Sepharose Fast-Flow(GE Healthcare)樹脂的平均孔徑一般遠小于(參考文獻：Yao Y，LenhoffAM.J Chromatogr A.2004 May 28；1037(1-2)：273-82)。現有技術制備的大孔徑層析樹脂如POROS微球(ThermoFisher)以及UNOsphere微球(Bio-Rad)，平均孔徑也只有將近(參考文獻：Trilisky EI.Stationary and mobile phase selectionfor ion-exchange chromatography of viruses[Ph.D.]University of Delaware；Newark，DE：2009)。

伴隨著生物技術的發展，層析介質及分離純化工藝也面臨許多新的挑戰。當面臨超大分子純化，常規瓊脂糖凝膠和聚合物微球介質由于孔徑尺寸較小，無法滿足分離的需要。例如純化多亞基疫苗分子、病毒顆粒、類病毒顆粒等，目標物粒徑通常為幾十到幾百納米，因此需要開發超大孔徑層析樹脂(大于)來純化或者去除病毒顆粒。

發明內容

本發明應用超大孔徑(大于)層析樹脂來純化或者去除病毒顆粒，本發明所述方法中病毒回收率高達65％左右，工藝穩定，易于放大。

為實現上述技術目的，本發明的技術方案是，超大孔徑層析介質在純化病毒顆粒的應用，所述超大孔徑層析介質帶有離子交換功能基團，所述粒徑≥40um。

優選的，所述超大孔徑層析介質的孔徑在之間。

優選的，所述超大孔徑層析介質的粒徑在50～80μm之間。

優選的，所述超大孔徑層析介質的基材是聚苯乙烯-二乙烯苯共聚物或者聚甲基丙烯酸酯共聚物。

優選的，所述超大孔徑層析介質帶有的離子交換功能基團為DEAE。