[發明專利]一種線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810860396.5
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN108822575B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 蔣玉仁;趙雄杰;李雨婷;楊冰清
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C09B57/00
• 分類號: C09B57/00;C09K11/06;G01N21/64
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1.一種線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba，其特征是具有如式(I)化學結構的化合物：

2.一種權利要求1所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba的制備方法，其特征是采用2-(4-二乙氨基-2-羥基苯甲酰基)苯甲酸與環己酮為原料，經縮合反應得到化合物1，再與對苯二甲醛進行縮合反應得到如式(I)的化合物，反應步驟為：

3.一種權利要求1或2所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

(1)在環己酮的濃硫酸溶液中，加入2-(4-二乙氨基-2-羥基苯甲酰基)苯甲酸，于一定溫度下攪拌反應，跟蹤反應至終點，將反應液倒入冰水中，滴入70wt％高氯酸，收集析出的固體并干燥，得到化合物1；

(2)將化合物1與對苯二甲醛溶于冰乙酸，于一定溫度下攪拌反應，跟蹤反應至終點，分離提純得到式(I)所示化合物。

4.根據權利要求3所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中，2-(4-二乙氨基-2-羥基苯甲酰基)苯甲酸與環己酮的摩爾比為1:1-3；

所述步驟(1)中，2-(4-二乙氨基-2-羥基苯甲酰基)苯甲酸與環己酮總質量與濃硫酸的質量比為1:5-10；

所述步驟(1)中，反應溫度為20-110℃；

所述步驟(2)中，化合物1與對苯二甲醛摩爾比為1:0.8-1.2；

所述步驟(2)中，每毫摩爾化合物1所用冰乙酸的體積為2-20ml；

所述步驟(2)中，反應溫度為20-120℃；

所述步驟(2)中的分離提純方法為：反應完成后，旋轉蒸餾除去溶劑，殘余固體用二氯甲烷與甲醇的混合溶劑柱層析分離，得到式(I)所示化合物。

5.一種權利要求1所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba的應用，其特征在于，所述線粒體定位近紅外熒光染料及基于該染料的探針應用于水體系、有機體系或生物體系中。

6.一種權利要求1所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba用于制備熒光探針，其特征在于該熒光探針具有如式(II)的化學結構：

7.一種權利要求6所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，由熒光染料THX-Ba與二氨基馬來腈經縮合反應得到，制備反應步驟如下：

8.一種權利要求6或7所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

將熒光染料THX-Ba溶于醇類有機溶劑，加入二氨基馬來腈及98wt％濃硫酸，于一定溫度攪拌反應，跟蹤反應到終點，分離提純得到式(II)所示化合物。

9.根據權利要求8所述的熒光探針的制備方法，其特征在于：

所述步驟中，醇類有機溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇的任一種；

所述步驟中，染料THX-Ba與二氨基馬來腈的摩爾比為1:0.8-1.5；

所述步驟中，染料THX-Ba與H₂SO₄的摩爾比為100-10:1；

所述步驟中，醇類有機溶劑的用量為10-50ml/毫摩爾染料THX-Ba；

所述步驟中，反應溫度為0-80℃；

所述步驟中，分離提純的方法為：反應完成后，旋轉蒸餾除去溶劑，殘余物用二氯甲烷與甲醇的混合溶劑柱層析分離，得到式(II)所示化合物。

10.根據權利要求5或6所述的線粒體定位近紅外熒光染料THX-Ba的應用，其特征在于，用作次氯酸熒光探針；以一個波段熒光從無到有且逐漸增強的方式檢測次氯酸，探針本身在666nm處基本無熒光，與次氯酸作用后，溶液在666nm處出現熒光信號，且逐漸增強；探針與細胞孵育后，用635nm的激發波長，在650-750nm波長范圍內實現線粒體定位的熒光成像應用。