[發明專利]用于合成谷胱甘肽的重組菌及谷胱甘肽的合成方法

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• 申請號: 201810857458.7
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN109055291A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 許激揚;趙玉成;王鄭隆;徐繼嗣
• 申請（專利權）人: 張家港市華天藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;周敏

1.一種用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述的重組菌包括第一重組質粒和第二重組質粒，所述的第一重組質粒包括GS片段和pET-22b載體片段，所述的第二重組質粒包括fliY片段和pET-28a載體片段。

2.根據權利要求1所述的用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述的GS片段位于所述的pET-22b載體片段的T7啟動子之下；所述的fliY片段位于所述的pET-28a載體片段的T7啟動子之下。

3. 根據權利要求1所述的用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述的GS片段的DNA序列與SEQ ID NO.1所示序列至少具有80%的同源性；所述的fliY片段的DNA序列與SEQID NO.2所示序列至少具有80%的同源性。

4.根據權利要求1所述的用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述的第一重組質粒包括卡那霉素抗性基因片段和氨芐青霉素抗性基因片段中的一種；所述的第二重組質粒包括卡那霉素抗性基因片段和氨芐青霉素抗性基因片段中的另一種。

5.根據權利要求1所述的用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述的重組菌還包括無卡那霉素抗性和無氨芐青霉素抗性的大腸桿菌。

6. 根據權利要求5所述的用于合成谷胱甘肽的重組菌，其特征在于：所述大腸桿菌為E.coli BL21(DE3)。

7.一種如權利要求1至6中任一項所述的重組菌的制備方法，其特征在于：將所述的第一重組質粒和所述的第二重組質粒轉化入無卡那霉素抗性和無氨芐青霉素抗性的大腸桿菌中，獲得所述的重組菌。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述的第一重組質粒的制備方法為：

A）PCR擴增獲得GS片段；

B）將所述的GS片段克隆入pET-22b中，得到所述的第一重組質粒；

所述的第二重組質粒的制備方法為：

A）PCR擴增獲得fliY片段；

B）將所述的fliY片段克隆入pET-28a載體片段中，得到所述的第二重組質粒。

9.一種谷胱甘肽的合成方法，其特征在于：通過對權利要求1至6中任一項所述的重組菌進行培養，得到所述的谷胱甘肽。

10.根據權利要求9所述的合成方法，其特征在于：所述的培養的溫度為25~37℃，誘導劑的濃度為0.1~1mmol/L；誘導劑的添加時間為3~5小時，培養基中的碳源為濃度為1~50g/L的葡萄糖、蔗糖或果糖；氮源為濃度為1~50g/L的(NH₄)₂SO₄、NH₄Cl或牛肉膏；微量元素為濃度為5~500mg/L的MgSO₄、ZnSO₄或MnSO₄；培養時間為6~24小時。