[發(fā)明專利]一種PCR模板用DNA樣本提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810856883.4
• 申請(qǐng)日: 2018-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN108913686A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何梁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安秦杰農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 成都東唐智宏專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51261
• 代理人: 羅言剛

一種PCR模板用DNA樣本提取方法,包括如下步驟:鮮嫩葉片研磨成粉末,葉片容器中加入0.15?0.3MOL/L摩爾濃度的氫氧化鈉溶液,溶液質(zhì)量為葉片質(zhì)量的3?10倍,所述氫氧化鈉溶液中含有5?10%質(zhì)量濃度的EDTA?2鈉;以沸水加熱氫氧化鈉溶液和葉片粉末的混合物30?120秒;搖勻后離心使懸濁液分層,取上清液,用1?10MOL/升的Tris－HCl將上清液稀釋5?20倍,即得到植物DNA樣本。采用本發(fā)明所述PCR模板用DNA樣本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取過程中的氧化現(xiàn)象，提高DNA提取率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及植物DNA樣本提取，具體涉及一種PCR模板用DNA樣本提取方法。

背景技術(shù)

DNA即脫氧核糖核酸是分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜的有機(jī)化合物。作為染色體的一個(gè)成分而存在于細(xì)胞核內(nèi)。功能為儲(chǔ)藏遺傳信息。DNA 分子巨大，由核苷酸組成。植物DNA的提取是植物分子生物學(xué)和基因工程研究的一種基本的技術(shù), 包括CTAB,SDS等多種方法；DNA活性極高，容易被氧化;現(xiàn)有技術(shù)中植物提取DNA中，DNA容易被氧化造成脫氧核酸樣本變質(zhì)損壞。

PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，加入設(shè)計(jì)引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。但DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活，因此，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價(jià)格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的技術(shù)缺陷，本發(fā)明公開了一種PCR模板用DNA樣本提取方法。

本發(fā)明所述PCR模板用DNA樣本提取方法,包括如下步驟:

鮮嫩葉片研磨成粉末,葉片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩爾濃度的氫氧化鈉溶液,溶液質(zhì)量為葉片質(zhì)量的3-10倍,所述氫氧化鈉溶液中含有5-10%質(zhì)量濃度的EDTA-2鈉;

以沸水加熱氫氧化鈉溶液和葉片粉末的混合物 30-120秒;搖勻后離心使懸濁液分層,取上清液, 用1-10MOL/升的Tris－HCl將上清液稀釋5-20倍,即得到植物DNA樣本。

優(yōu)選的，所述鮮嫩葉片研磨成粉末是在液氮浸泡環(huán)境下進(jìn)行。

采用本發(fā)明所述PCR模板用DNA樣本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取過程中的氧化現(xiàn)象，提高DNA提取率。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。

本發(fā)明所述PCR模板用DNA樣本提取方法,包括如下步驟:

鮮嫩葉片研磨成粉末,葉片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩爾濃度的氫氧化鈉溶液,溶液質(zhì)量為葉片質(zhì)量的3-10倍,所述氫氧化鈉溶液中含有5-10%質(zhì)量濃度的EDTA-2鈉;

以沸水加熱氫氧化鈉溶液和葉片粉末的混合物 30-120秒;搖勻后離心使懸濁液分層,取上清液, 用1-10MOL/升的Tris－HCl將上清液稀釋5-20倍,即得到植物DNA樣本。

植物DNA提取檢材應(yīng)選擇幼嫩葉片，如選擇老葉，老葉中含有大量多糖和酚類雜質(zhì)，不利于DNA提取。

研磨過程可以在液氮浸泡環(huán)境下進(jìn)行，避免研磨過程中的空氣氧化，液氮低溫也利于帶走研磨帶來的熱量，避免DNA受熱變質(zhì)。