[發(fā)明專利]一種污泥中蛋白質(zhì)的提取方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810855851.2
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN108949574A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王偉云;張進(jìn);臧瑩;李潤東
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽航空航天大學(xué)
• 主分類號: C12N1/06
• 分類號: C12N1/06;C07K1/14;C07K1/30;C07K1/36
• 代理公司: 沈陽維特專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 21229
• 代理人: 陳福昌

1.一種污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)、采用超聲波與木瓜蛋白酶聯(lián)合處理污泥，得蛋白質(zhì)粗提液；

11)、取污泥，利用超聲波破壞微生物細(xì)胞表面的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，其中，超聲功率為150-200W，時間為30-50min，以污泥總懸浮固體(TSS)值為基準(zhǔn)，每克TSS加入0.03-0.05g木瓜蛋白酶，并放到溫度為55-65℃，轉(zhuǎn)速為150-170r/min的恒溫振蕩器中4-6h進(jìn)行水解，水解完成后在沸水中滅活，得處理后的污泥；

12)、對處理后的污泥進(jìn)行冷卻，并將其在8000-11000g的條件下離心15-25min后棄沉淀，離心后的上清液即為蛋白質(zhì)粗提液；

2)、采用硫酸銨沉淀法與透析袋吸附法耦合的方式純化并濃縮蛋白質(zhì)粗提液，得蛋白質(zhì)精提液；

21)、向每升蛋白質(zhì)粗提液中緩慢加入200-400g硫酸銨固體，攪拌5-7h后在2-6℃條件下靜置1h以上，之后，將靜置后的液體在2-6℃，8000-11000g下離心10-20min，棄掉上清液得到沉淀；

22)、將步驟21)中得到的沉淀溶于蒸餾水至全部溶解后放入透析袋中，其中，所述透析袋的規(guī)格為15000-25000Da，外部為緩沖溶液，透析24h以上，取出透析袋放到空燒杯中，在透析袋表面均勻撒上分子量與透析袋的截留分子量相同的聚乙二醇，2-4h后得到濃縮液，即為蛋白質(zhì)精提液。

2.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟11)中，向污泥中添加的木瓜蛋白酶的添加量為0.04g/gTSS。

3.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟11)中，恒溫振蕩器的轉(zhuǎn)速為160r/min，溫度60℃，水解時間為5h。

4.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟12)中，冷卻后的污泥在10000g的條件下離心20min，離心后的上清液即為蛋白質(zhì)粗提液。

5.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟21)中，硫酸銨固體的添加量為300g/L，攪拌時間為6h。

6.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟21)中，靜置后的液體在4℃，10000g下離心15min，棄掉上清液得到沉淀。

7.按照權(quán)利要求1所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法，其特征在于：步驟22)中，所述透析袋的規(guī)格為20000Da，透析時間為24h。

8.利用權(quán)利要求1至7中所述的污泥中蛋白質(zhì)的提取方法提取出來的蛋白質(zhì)在生產(chǎn)葉面肥上的應(yīng)用，其特征在于：利用所述方法提取出來的蛋白質(zhì)作為生產(chǎn)葉面肥的原料。