[發(fā)明專利]一種適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810853915.5
• 申請(qǐng)日: 2018-07-30
• 公開（公告）號(hào): CN108848994A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐美隆;劉靜;謝軍;劉玉娟;喬改霞;仝倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏林業(yè)研究院股份有限公司
• 主分類號(hào): A01G2/35
• 分類號(hào): A01G2/35;A01G7/06;A01G31/00
• 代理公司: 廣州市一新專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44220
• 代理人: 張芳

本發(fā)明涉及一種適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法，其特點(diǎn)是，包括如下步驟：(1)以培養(yǎng)30?40天的砧木品種組培苗為材料；(2)以培養(yǎng)30?40天的接穗品種組培苗為材料；(3)在無(wú)菌條件下，將接穗斜面端插入砧木的切口，形成嫁接苗；(4)用鑷子壓迫U型卡子兩端使U型卡子夾緊固定住嫁接苗的嫁接口；(5)將嫁接好的微型嫁接苗插入準(zhǔn)備好的絲瓜瓤上，然后將插有微型嫁接苗的絲瓜瓤放入盛有50ml液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。本發(fā)明方法有益效果為：①篩選出一種適合多個(gè)葡萄砧穗組合培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基配方，利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的葡萄嫁接苗生根率達(dá)100％，且培養(yǎng)出的根系較固體培養(yǎng)更發(fā)達(dá)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)

微嫁接技術(shù)是一種組織培養(yǎng)與嫁接相結(jié)合、將不同品種的砧木與接穗組培苗在組織培養(yǎng)條件下進(jìn)行嫁接的技術(shù)。從20世紀(jì)50年代杜林博斯利用常春藤最先應(yīng)用莖尖嫁接技術(shù)以來(lái),微型嫁接技術(shù)獲得飛速的發(fā)展。美國(guó)、法國(guó)、意大利、西班牙、南非、以色列、日本和中國(guó)先后相繼在柑橘、蘋果、桃、櫻桃、杏、李、草莓、葡萄、鱷梨、巴旦杏、棗、庫(kù)爾勒香梨等果樹微嫁接時(shí)應(yīng)用。該項(xiàng)技術(shù)現(xiàn)主要用于果樹嫁接苗快速繁育、脫毒苗培育、嫁接親和性鑒定、病毒檢測(cè)及果樹嫁接苗抗逆性機(jī)理研究等。

當(dāng)前，果樹微嫁接苗培育的方式主要以固體培養(yǎng)為主，且研究主要集中在培養(yǎng)基配方、嫁接方式、砧穗親和性等方面，對(duì)微嫁接的具體方法研究較少，而在具體操作過(guò)程中，由于砧穗結(jié)合不牢固或砧木、接穗處理不當(dāng)導(dǎo)致嫁接容易失敗。相對(duì)于固體培養(yǎng)而言，液體培養(yǎng)更利于微嫁接苗根系的生長(zhǎng)，且更適合通過(guò)短時(shí)間逆境脅迫(在培養(yǎng)基中添加PEG、ABA等)進(jìn)行嫁接苗抗逆機(jī)理研究。雖然有極少數(shù)研究已經(jīng)開展了果樹微嫁接苗的液體培養(yǎng)，但其液體培養(yǎng)的支撐物主要是紙橋，在培養(yǎng)過(guò)程中容易因紙橋損壞而導(dǎo)致嫁接苗培育失敗。在國(guó)內(nèi)，葡萄微嫁接苗的培育已有相關(guān)的研究報(bào)道，但嫁接成活率偏低(低于70％)，且未見有葡萄微嫁接液體培養(yǎng)的相關(guān)報(bào)道。針對(duì)以上問(wèn)題，本發(fā)明主要對(duì)葡萄嫁接苗培育的生根培養(yǎng)基、砧木、接穗處理方式、嫁接固定方式和液體培養(yǎng)支撐物等進(jìn)行了創(chuàng)新，并建立了一種完善的適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法，該方法可以應(yīng)用于多個(gè)不同的葡萄砧穗組合嫁接苗培育，通過(guò)該方法嫁接的葡萄苗，根系發(fā)達(dá)，嫁接成活率超過(guò)85％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于現(xiàn)有的葡萄微嫁接苗培育的成活率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法，該方法操作簡(jiǎn)單，葡萄微嫁接苗成活率高、根系發(fā)達(dá)，不僅能夠適用于葡萄嫁接苗的工廠化生產(chǎn)，還便于葡萄嫁接苗抗逆性研究。

一種適合葡萄微嫁接苗液體培養(yǎng)的方法，其特別之處在于，包括如下步驟：

(1)以培養(yǎng)30-40天的砧木品種組培苗為材料，去掉上端細(xì)小的部分和下端木質(zhì)化部分，留取長(zhǎng)度為2～3cm并且粗度大于1mm的中間莖段作為砧木，用手術(shù)刀剔除掉莖段上所有的葉片和腋芽；

(2)以培養(yǎng)30-40天的接穗品種組培苗為材料，取帶有飽滿腋芽的莖段作為接穗，去掉葉片，每個(gè)莖段上部只留一個(gè)腋芽，要求接穗長(zhǎng)度大于1cm，粗度大于1mm；

(3)在無(wú)菌條件下，用手術(shù)刀在步驟(1)中準(zhǔn)備好的砧木上端切開一個(gè)0.4-0.6cm的切口，將步驟(2)中準(zhǔn)備好的接穗下端斜切一個(gè)斜面，斜面角度≤30度，然后將接穗斜面端插入砧木的切口，形成嫁接苗；

(4)選用厚度為1-1.2mm的鋁箔片，將鋁箔片剪成長(zhǎng)2cm寬0.5cm的矩形小條，然后對(duì)折成U型卡子，將制備好U型卡子置于耐高溫的密閉容器中進(jìn)行高壓滅菌，用滅菌后的U型卡子夾在步驟(3)中嫁接苗的嫁接口上，用鑷子壓迫U型卡子兩端使U型卡子夾緊固定住嫁接苗的嫁接口；

(5)選取成熟的絲瓜瓤，曬干后去籽，然后將其剪成邊長(zhǎng)為4-5cm的正方形小塊，放入耐高溫的密閉容器中，再加入少量蒸餾水，密封后高壓滅菌備用；