[發(fā)明專利]一種白血病細(xì)胞樣本的凍存液及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810852423.4
• 申請日: 2018-07-27
• 公開（公告）號: CN108849859B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周芙玲;徐安潔;吳八路;吳江;葉丹
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

本發(fā)明公開了一種白血病細(xì)胞樣本的凍存液及其制備方法，屬于細(xì)胞凍存技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的凍存液由溶液A、自體血漿和DMSO按體積比1:1:0.04組成，其中溶液A的溶劑為萬汶溶液，包含維生素A、維生素C、茶多酚、海藻糖，溶液A中維生素A、維生素C、茶多酚、海藻糖的終濃度分別為10mg/mL、10mg/mL、0.5mg/mL、20mg/mL。將溶液A、自體血漿和DMSO按照比例混合均勻，即可得到本發(fā)明的凍存液。本發(fā)明凍存液配制簡單、成本低，其可以長期保存白血病細(xì)胞，細(xì)胞活性不發(fā)生變化，且復(fù)活細(xì)胞存活率可達(dá)95％以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞凍存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種白血病細(xì)胞樣本的凍存液及其制備方法。

背景技術(shù)

白血病是危害人類的重要的腫瘤之一，在白血病診斷與治療的研究中，臨床凍存的白血病細(xì)胞標(biāo)本對白血病的診斷分型、病情監(jiān)測和指導(dǎo)治療的研究、臨床樣本庫的構(gòu)建均有重要意義，對其需求量也很大，因此開展更加簡易有效的方法凍存白血病標(biāo)本是本領(lǐng)域迫切的需求，建立一種長期低溫保存白血病細(xì)胞的方法對于白血病診斷和治療的研究具有重大意義。

如果單純的凍存，在凍存過程中細(xì)胞會(huì)受到兩個(gè)方面的損傷：第一，在凍存的過程中，胞外的水分首先結(jié)冰，使得未結(jié)冰的溶液中的電解質(zhì)濃度升高，造成細(xì)胞死亡，屬于滲透性損傷；第二由于低溫導(dǎo)致細(xì)胞胞內(nèi)形成冰晶會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)，屬于機(jī)械損傷。因此結(jié)合以上兩點(diǎn)原因，必須解決冷凍的速度，及凍存劑的配方，復(fù)蘇時(shí)融凍的速度也直接影響細(xì)胞的活性。

傳統(tǒng)的白血病細(xì)胞凍存過程中，凍存液大都會(huì)加入胎牛血漿，其對于細(xì)胞的生長起著重要作用，但同時(shí)也成為臨床應(yīng)用的障礙。胎牛血漿可能有細(xì)菌及病毒感染的可能，特別是朊病毒可以導(dǎo)致瘋牛病，另外，可能引起局部免疫反應(yīng)或炎性反應(yīng)。用商品化的無血漿培養(yǎng)基替代動(dòng)物血漿培養(yǎng)細(xì)胞，在實(shí)際應(yīng)用中仍存在一些問題，如培養(yǎng)基研制成本高，不具有通用性，僅限于特定的細(xì)胞培養(yǎng)等。在培養(yǎng)基中加入特定的細(xì)胞因子，成本則更加昂貴，其提取制備工藝復(fù)雜，產(chǎn)率低，成本可觀，還具有潛在的毒性、致基因突變等缺點(diǎn)，使其不能滿足臨床應(yīng)用的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)與不足，提供一種白血病細(xì)胞樣本的凍存液，使用該凍存液能夠極大幅度提高白血病細(xì)胞的存活率。本發(fā)明的目的還在于提供所述凍存液的制備方法。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種白血病細(xì)胞樣本的凍存液，由溶液A、自體血漿和二甲基亞砜(DMSO)組成。所述溶液A的溶劑為萬汶溶液，包含維生素A、維生素C、茶多酚、海藻糖。

進(jìn)一步優(yōu)選的，溶液A、自體血漿和DMSO的體積比為1:1:0.04。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述溶液A中維生素A、維生素C、茶多酚、海藻糖的終濃度分別為10mg/mL、10mg/mL、0.5mg/mL、20mg/mL。

上述白血病細(xì)胞樣本的凍存液的制備方法，包括以下步驟：

(1)往萬汶中加入維生素A、維生素C、茶多酚、海藻糖配制溶液A。

(2)采集要凍存白血病細(xì)胞樣本的患者的血液，分離自體血漿。

(3)將溶液A、自體血漿和DMSO按照比例混合均勻，得到白血病細(xì)胞樣本的凍存液。

上述白血病細(xì)胞樣本的凍存液在凍存白血病細(xì)胞中的應(yīng)用。

本發(fā)明凍存液中，海藻糖、維生素E可以抵抗冰結(jié)晶的損傷，維生素C和茶多酚可以抵抗細(xì)胞氧化，保持細(xì)胞的活性，萬汶和自體血漿中的白蛋白可以更好地保護(hù)干細(xì)胞。這幾種物質(zhì)聯(lián)用制成的凍存液用于凍存白血病細(xì)胞，極大幅度提高了凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率，具有非常好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：