[發明專利]一種基于PS@Au雙重抑制ZnCdS的光電化學凝血酶適配體傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810851631.2
• 申請日: 2018-07-30
• 公開（公告）號: CN108918873B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 范大偉;鮑春竹;劉昕;張勇;王歡;吳丹;馬洪敏;魏琴;杜斌;胡麗華
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 高強

1.一種基于PS@Au雙重抑制ZnCdS的光電化學凝血酶適配體傳感器的制備方法及應用，所述的光電化學凝血酶適配體傳感器由ITO工作電極、鋅、鎘共摻雜硫化物ZnCdS納米晶、凝血酶適配體、牛血清白蛋白、凝血酶、氨基化的聚苯乙烯微球負載金納米粒子的二抗孵化物PS@Au-TBA組成；

其特征在于，所述的制備方法包括以下制備步驟：

一、ZnCdS的制備；

二、PS@Au-TBA的制備；

三、光電化學凝血酶適配體傳感器的制備；

其中，步驟一制備ZnCdS的具體步驟為：

稱取1 ~ 3 g Zn(Ac)₂·2H₂O和1 ~ 3 g Cd(NO₃)₂·4H₂O于圓底燒瓶中，加入20 ~ 40mL超純水和1 ~ 2 mL氨水，再將5 ~ 10 mL離子液緩慢滴入圓底燒瓶中，將上述混合溶液超聲30 ~ 40 min，另取2 ~ 4 g硫化鈉溶于8 ~ 16 mL超純水中并超聲30 ~ 40 min，超聲后將其在高速攪拌下滴加到圓底燒瓶中，反應1 ~ 2 h后溶液變為黃色，然后把混合液轉移到50 ~ 100 mL反應釜中，在100 ~ 150℃下煅燒6 ~ 9 h，將產物用超純水和無水乙醇各洗滌3次，并在90℃真空干燥箱中干燥10 ~ 12 h小時，然后使產物自然冷卻至室溫，得到黃色的鋅、鎘共摻雜硫化物ZnCdS納米晶，將其溶于超純水中，得到ZnCdS懸浮液；

所述的離子液為1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽溶液；

其中，步驟二制備PS@Au-TBA的具體步驟為：

取0.01 ~ 0.02 g檸檬酸鈉溶于40 ~ 80 mL超純水中，然后依次加入2 ~ 4 mL、5 ~ 7mmol·L^-1的HAuCl₄和200 ~ 400 μL氨基聚苯乙烯微球PS并攪拌5 ~ 10 min，然后在攪拌的條件下將溶液加熱煮沸并反應15 ~ 30 min，待冷卻至室溫后離心并用超純水洗滌2 ~ 3次，將得到的沉淀重新分散在50 ~ 100 μL超純水中，逐滴滴加2 ~ 4 mL巰基化凝血酶適配體，邊滴加邊搖蕩，混勻后將該溶液置于4℃下恒溫震蕩孵化12 ~ 14 h，再加入1 ~ 3 mL的BSA溶液，室溫下震蕩1 ~ 1.5 h用于封閉非特異性位點，制得PS@Au-TBA，并將其置于4℃冰箱中冷藏備用；

其中，步驟三制備光電化學凝血酶適配體傳感器的具體步驟為：

（a）將氧化銦錫ITO電極切割至2.5 cm × 0.8 cm大小，依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗30 ~ 40 min，用氮氣吹干后，將8 ~ 10 μL的ZnCdS懸浮液修飾到ITO電極上，室溫下晾干，然后在400 ~ 500℃馬弗爐中煅燒30 ~ 40 min，取出后自然冷卻至室溫，得到ITO/ZnCdS電極；

（b）在步驟（a）中得到的電極表面修飾4 ~ 8 μL濃度為 5 ~ 8 μmol·L^-1的羧基化凝血酶適配體，在室溫下反應1 ~ 2 h，使得凝血酶適配體的羧基和ZnCdS復合材料中Zn與Cd原子配位結合，再用超純水洗滌去除未結合上的凝血酶適配體，4℃冰箱中晾干；

（c）在步驟（b）中得到的電極表面修飾4 ~ 8 μL的1 ~ 1.5 %牛血清蛋白溶液以封閉非特異性結合位點，室溫下反應1 ~ 1.5 h，用超純水洗滌，4℃冰箱中晾干；

（d）在步驟（c）中得到的電極表面滴加4 ~ 8 μL不同濃度的凝血酶溶液，15℃環境下孵化1 ~ 1.5 h，通過酶與適配體特異性識別免疫反應將其固定在電極表面，再用超純水清洗多余的凝血酶，4℃冰箱中晾干；

（e）在步驟（d）中得到的電極表面滴涂4 ~ 8 μL PS@Au-TBA，15℃環境下孵化1 ~ 1.5h，通過氨基與羧基的結合將其固定在電極表面，再用超純水清洗，4℃冰箱中晾干，即制得光電化學凝血酶適配體傳感器。