[發(fā)明專利]一種GFP抗體制備方法及其載體

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810839333.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110759999A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜孩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳康體生命科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/18
• 分類號(hào): C07K16/18;C12N15/85;C40B50/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種GFP抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

對(duì)羊駝進(jìn)行GFP免疫；

通過(guò)免疫后的羊駝的外周血淋巴細(xì)胞，構(gòu)建噬菌體文庫(kù)；

從所述噬菌體文庫(kù)中篩選對(duì)應(yīng)的GFP抗體基因序列；

表達(dá)純化所述GFP抗體基因序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述對(duì)羊駝進(jìn)行GFP免疫具體包括：

使用大腸桿菌重組表達(dá)的帶His標(biāo)簽的GFP蛋白作為抗原；

使用GERBU-LQ與所述抗原混合乳化后作為免疫原，注射到羊駝中進(jìn)行免疫。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述構(gòu)建噬菌體文庫(kù)具體包括：

分離制備羊駝免疫后的外周血淋巴細(xì)胞；

提取所述外周血淋巴細(xì)胞的RNA；

反轉(zhuǎn)錄所述RNA為cDNA；

使用PCR特異性擴(kuò)增所述cDNA的抗體片段；

將擴(kuò)增后的抗體片段克隆至噬菌體質(zhì)粒中；

將克隆有所述抗體片段的噬菌體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞；

通過(guò)所述感受態(tài)細(xì)胞，擴(kuò)增和純化所述噬菌體文庫(kù)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述從所述噬菌體文庫(kù)中篩選對(duì)應(yīng)的GFP抗體基因序列，具體包括：

A、包被免疫管；

B、封閉免疫管及噬菌體文庫(kù)；

C、在免疫管中孵育抗原和噬菌體；

D、清洗孵育后的免疫管若干次；

E、洗脫篩選。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述洗脫篩選具體包括：

向孵育后的免疫管中加入1mL 100mM Trimethymime，并室溫孵育10分鐘；

室溫孵育10分鐘后，加入1M Tris-HCl中和Trimethymime并洗脫；

將洗脫噬菌體轉(zhuǎn)移到新的離心管中；

洗脫后的噬菌體重新進(jìn)行擴(kuò)增和純化；

在噬菌體擴(kuò)增和純化后，重復(fù)所述步驟A到步驟E兩次，逐次將包被免疫管的抗體量減半，獲得目標(biāo)洗脫噬菌體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述清洗孵育后的免疫管若干次，具體包括：

用含有0.01％吐溫的PBS清洗所述孵育后的免疫管20次；每次清洗時(shí)間為5分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，包被免疫管具體包括：

將100ug GFP抗體加入到2mL PBS中；

將所述混合物加入到免疫管中，在4攝氏度下，過(guò)夜孵育。

8.一種載體，其特征在于，所述載體包含如權(quán)利要求1-7任一所述的制備方法獲得GFP抗體基因序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的載體，其特征在于，所述載體為用于表達(dá)所述GFP抗體基因序列的表達(dá)載體。