[發明專利]一種檢測犬EPAS1和HBB基因突變體的引物、PCR方法、試劑盒及其應用在審
| 申請號： | 201810837276.3 | 申請日： | 2018-07-26 |
| 公開（公告）號： | CN108913785A | 公開（公告）日： | 2018-11-30 |
| 發明（設計）人： | 李靜;陳超;王國棟;陳方良;韋云芳;萬九生;林娜;星云;張松 | 申請（專利權）人： | 公安部昆明警犬基地 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 昆明正原專利商標代理有限公司 53100 | 代理人： | 金耀生;于洪 |
| 地址： | 650204*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 基因突變體 生物樣本 試劑盒 種檢測 高原 應用 基因多態性位點 生物技術領域 基因組序列 高原疾病 核酸樣本 突變位點 序列分析 基因型 擴增 犬類 突變 防治 預測 預防 研究 | ||
1.檢測犬EPAS1和HBB基因突變體的引物，其特征在于，包括四對引物對，G305S F和G305S R、D494E/V500M F和D494E/V500M R、P750S F和P750S R、G14S/L15M F和G14S/L15MR；
G305S F：gaggaaactgaaactaagagggatt；
G305S R：caggttgcgagggttgtagataa；
D494E/V500M F：ccgagtagacagcccaaacagga；
D494E/V500M R：gagcaaagcagagggcaaaggta；
P750S F：acagggctggatggaaactc；
P750S R：atgacagatggcggcggtgg；
G14S/L15M F：gactcaccttgaagttctcggg；
G14S/L15M R：aaacataacacctagaacgccac。
2.含有權利要求1所述檢測犬EPAS1和HBB基因突變體的引物的試劑盒。
3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括PCR擴增試劑。
4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴增試劑包括dNTPs、rTaq酶和10×Buffer。
5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，其擴增體系為：
模板 1μL，
上游引物10pmol 0.63μL，
下游引物10pmol 0.63μL，
10×Buffer 2.5μL，
dNTPs 1.3μL，
rTaq酶 0.13μL，
余量去離子H2O，總計25μL；
所述的上游引物和下游引物所組成的引物對為G305S F和G305S R、D494E/V500M F和D494E/V500M R、P750S F和P750S R、G14S/L15M F和G14S/L15M R四對引物中的任意一種。
6.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒的擴增程序：預變性94℃15min，循環中94℃變性1min，退火1min，72℃延伸1min，35個循環后，72℃延伸20min后終止反應；
G305S F和G305S R引物對的退火溫度為61.5℃；
D494E/V500M F和D494E/V500M R引物對的退火溫度為66℃；
P750S F和P750S R引物對的退火溫度為66℃；
G14S/L15M F和G14S/L15M R引物對的退火溫度為61.5℃。
7.權利要求1所述擴增引物在判斷犬是否具有高原適應性中的應用。
8.權利要求2-6任意一項所述試劑盒在判斷犬是否具有高原適應性中的應用。
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