[發(fā)明專利]用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810835502.4
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108949524B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高興華;李開艷;楊興遠(yuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號: C12M1/22
• 分類號: C12M1/22;C12M1/26
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于，所述籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿由四個基本部分拼接組裝組成：

第一個基本部分為底面修飾后的培養(yǎng)皿（4），即在培養(yǎng)皿（4）底部結(jié)合生物相容性材料薄膜層，形成培養(yǎng)皿（4）容器內(nèi)層；

第二個基本部分為修飾后的聚合物微孔陣列組件（3），采用具有鏤空微孔陣列結(jié)構(gòu)的生物相容性材料薄膜，使聚合物微孔陣列組件（3）具有陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽，聚合物微孔陣列組件（3）外緣尺寸小于培養(yǎng)皿（4）容器內(nèi)腔尺寸，能將聚合物微孔陣列組件（3）設(shè)置于培養(yǎng)皿（4）容器內(nèi)的底部；

第三個基本部分為細(xì)胞篩網(wǎng)（2），設(shè)置于聚合物微孔陣列組件（3）上方，細(xì)胞篩網(wǎng)（2）對聚合物微孔陣列組件（3）的具有陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽形成結(jié)網(wǎng)式覆蓋結(jié)構(gòu)，細(xì)胞篩網(wǎng)（2）采用生物相容性材料網(wǎng)形的網(wǎng)片組件，網(wǎng)孔大小能滿足原始待培養(yǎng)的細(xì)胞通過并進(jìn)入聚合物微孔陣列組件（3）的具有陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽內(nèi)，并且使在培養(yǎng)皿（4）容器內(nèi)設(shè)置的聚合物微孔陣列組件（3）的細(xì)胞生長微孔槽內(nèi)經(jīng)過培養(yǎng)后的長大的細(xì)胞組織或細(xì)胞微團(tuán)無法通過穿越細(xì)胞篩網(wǎng)（2）進(jìn)行遷移；

第四個基本部分為細(xì)胞培養(yǎng)基貯存池（1），具有圍堰式環(huán)形結(jié)構(gòu)，作為培養(yǎng)皿（4）上緣的延伸增高組件，細(xì)胞培養(yǎng)基貯存池（1）與培養(yǎng)皿（4）上緣連接，使培養(yǎng)皿（4）容器內(nèi)腔深度增加；

制備了上述籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿的四個基本部分后，將它們依次封接組裝成完整的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，然后，將籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿的表面進(jìn)行修飾，修飾方法為：先將封接后的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿整體經(jīng)等離子體處理后，在紫外照射下進(jìn)行滅菌處理，然后依次浸入Pluronic F-127的水溶液、PBS緩沖溶液進(jìn)行沖洗，然后向籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿中加入細(xì)胞用培養(yǎng)基，備用；

在所述籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿中，單個細(xì)胞能通過細(xì)胞篩網(wǎng)（2）進(jìn)入聚合物微孔陣列組件（3）具有的陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽，在細(xì)胞生長微孔槽中經(jīng)培養(yǎng)形成三維微組織，形成后的三維微組織將不能再通過細(xì)胞篩網(wǎng)（2），而被困于所述籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于： 第一個基本部分底面修飾后的培養(yǎng)皿（4）與第二個基本部分修飾后的聚合物微孔陣列組件（3）采用等離子體封接或可逆封接，形成連接界面結(jié)構(gòu)，將聚合物微孔陣列組件（3）固定安裝在培養(yǎng)皿（4）容器腔內(nèi)底部位置處。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于： 第三個基本部分細(xì)胞篩網(wǎng)（2）覆蓋于聚合物微孔陣列組件（3）上方，并使第三個基本部分細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與聚合物微孔陣列組件（3）保持非接觸狀態(tài)，細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與培養(yǎng)皿（4）直接連接，使細(xì)胞篩網(wǎng)（2）對培養(yǎng)皿（4）的開口形成結(jié)網(wǎng)式覆蓋結(jié)構(gòu)，將聚合物微孔陣列組件（3）包封于由細(xì)胞篩網(wǎng)（2）覆蓋的培養(yǎng)皿（4）容器中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于： 第三個基本部分細(xì)胞篩網(wǎng)（2）直接覆蓋于聚合物微孔陣列組件（3）上，并使第三個基本部分細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與聚合物微孔陣列組件（3）保持直接接觸狀態(tài)，細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與聚合物微孔陣列組件（3）直接連接，使細(xì)胞篩網(wǎng)（2）對聚合物微孔陣列組件（3）的具有陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽直接形成結(jié)網(wǎng)式覆蓋結(jié)構(gòu)，對聚合物微孔陣列組件（3）的具有陣列式分布的細(xì)胞生長微孔槽的開口上緣直接進(jìn)行包封。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項所述用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于：

細(xì)胞培養(yǎng)基貯存池（1）與培養(yǎng)皿（4）上緣連接時，采用膠水加熱粘貼形成細(xì)胞培養(yǎng)基貯存池（1）環(huán)形端面與培養(yǎng)皿（4）上緣表面的連接部分；

或者，當(dāng)細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與培養(yǎng)皿（4）直接連接時，采用膠水加熱粘貼形成細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與培養(yǎng)皿（4）的連接部分；

或者，當(dāng)細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與聚合物微孔陣列組件（3）直接連接時，采用膠水加熱粘貼形成細(xì)胞篩網(wǎng)（2）與聚合物微孔陣列組件（3）的連接部分。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述用于體外細(xì)胞三維微組織形成的籠結(jié)構(gòu)微孔培養(yǎng)皿，其特征在于：該膠水是PDMS預(yù)聚體溶液。