[發明專利]一種檢測有機磷農藥多殘留的免疫分析試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810834024.5
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108931649A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 金茂俊;王靜;張嬋;杜鵬飛;佘永新;金芬;邵華;鄭鷺飛;王珊珊;王淼
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種基于熒光寡核苷酸信號放大技術檢測有機磷農藥多殘留的免疫分析試劑盒，其特征在于，包括如下組成：包被有抗原的黑色酶標板、膠體金探針溶液、洗液和二硫蘇糖醇溶液；

所述抗原包括三唑磷、對硫磷和毒死蜱；

所述膠體金探針為表面修飾有生物條形碼和以下任意一種特異性單克隆抗體的金納米粒子；所述特異性單克隆抗體包括三唑磷抗體、對硫磷抗體和毒死蜱抗體；所述金納米粒子表面修飾生物條形碼的數量為130～170條；

所述生物條形碼標記有熒光基團；修飾有相同單克隆抗體的金納米粒子表面對應修飾的生物條形碼被同一顏色的熒光基團標記；修飾有不同單克隆抗體的金納米粒子表面對應修飾的生物條形碼被不同顏色的熒光基團標記。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述三唑磷的包被濃度為0.12～0.2mg/L，所述對硫磷的包被濃度為0.56～0.7mg/L，所述毒死蜱的包被濃度為0.8～0.94mg/L。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述膠體金探針溶液的摩爾濃度為8～10nmol/L；所述金納米粒子的粒徑為12～14nm。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述洗液含有體積分數0.1～1％吐溫-20的0.005～0.015mol/L的PBS緩沖液。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述二硫蘇糖醇溶液的摩爾濃度為18～22nmol/L。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光基團包括6-FAM、CY-3和TEXASRed。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括農藥標準品。

8.根據權利要求1～7任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述膠體金探針的制備方法包括膠體金的合成、生物條形碼的活化、特異性單抗的標記和生物條形碼的標記。

9.權利要求1～8任一項所述試劑盒在檢測有機磷農藥多殘留中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述檢測有機磷農藥多殘留的方法包括如下步驟：

(1)向包被有抗原的黑色酶標板中加入待測樣品和膠體金探針溶液，37℃孵育0.5～2h，用洗液洗板；

(2)向所述步驟(1)洗板后的酶標板孔中加入二硫蘇糖醇溶液，37℃振蕩反應1～3h，檢測不同顏色熒光基團的熒光信號，分別測定熒光值；

(3)將測定的熒光值分別代入相應熒光信號的標準曲線形成的標準方程式中，計算得到不同類型有機磷農藥殘留的量。