[發明專利]一種定量檢測血漿中5種脂溶性維生素的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810833326.0
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN110763788A
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 魯靖睿;廖云莉;饒維橋;陳曉敏;周東生;訾金;林梁;劉斯奇
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種定量檢測血漿中多種脂溶性維生素的試劑盒，包括脂溶性維生素校準品、同位素混合標準品、脂溶性維生素質控品、儀器質控品、流動相添加劑；

所述脂溶性維生素校準品包括系列濃度已知的由50％甲醇溶解的視黃醇、25羥基維生素D₂、25羥基維生素D₃、α-生育酚和葉綠醌的混合溶液；

所述同位素混合標準品包括含量已知的視黃醇-d5、25羥基維生素D₂-d6、25羥基維生素D₃-d3、α-生育酚-d6、葉綠醌-d7的混合干粉；

所述脂溶性維生素質控品包括濃度已知的由混合血漿溶解的視黃醇、25羥基維生素D₂、25羥基維生素D₃、α-生育酚和葉綠醌的混合溶液；

所述儀器質控品包括濃度已知的由80％乙腈和0.1％甲酸溶解的視黃醇、25羥基維生素D₂、25羥基維生素D₃、α-生育酚和葉綠醌的混合溶液；

所述流動相添加劑是甲酸。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還含有SLE板；

進一步地，所述試劑盒中還含有深孔板、微孔板、過濾板和熱封鋁膜；

更進一步地，所述試劑盒中還含有操作說明書；所述操作說明書上記載有權利要求3-7中任一所述方法。

3.一種定量檢測血漿中多種脂溶性維生素含量的方法，包括如下步驟：

(a)配制稀釋劑、萃取劑和復溶液；

所述稀釋劑按照包括如下步驟的方法配制：向權利要求1中所述的同位素混合標準品中加入甲醇復溶，得到中間溶液I；然后將所述中間溶液I與50％異丙醇混合，即得所述稀釋劑；

所述萃取劑為正己烷；

所述復溶液按照包括如下步驟的方法配制：將乙腈與水混合，得到中間溶液II；然后將所述中間溶液II與甲酸混合，即得所述復溶液；

(b)將所述稀釋劑與待測血漿樣本混合后，將所得混合液轉移至權利要求1中所述的SLE板中，靜置后加入所述萃取劑進行萃取，得到含有脂溶性維生素的萃取液；

(c)用氮氣將所述萃取液吹干后用所述復溶液進行復溶，然后經超聲、過濾后得到待上機待測樣品；

(d)用液相色譜串聯質譜儀對所述待上機待測樣品和待上機標準品分別進行檢測，根據檢測結果得出所述待測血漿樣本中多種脂溶性維生素的含量；

所述待上機標準品為將權利要求1中所述的脂溶性維生素校準品替代步驟(b)和(c)中的所述待測血漿樣本后，按照步驟(b)和(c)進行操作后獲得的。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(a)中，在配制所述稀釋劑的過程中，所述同位素混合標準品與所述甲醇的配比為1.30845μg：1.3mL；和/或

步驟(a)中，在配制所述稀釋劑的過程中，所述中間溶液I與所述50％異丙醇的體積比為122μL：50mL；和/或

步驟(a)中，在配制所述復溶液的過程中，所述乙腈與所述水的體積比為80ml:20ml；和/或

步驟(a)中，在配制所述復溶液的過程中，所述中間溶液II與所述甲酸的體積比為1000:1。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(b)中，將所述稀釋劑與所述待測血漿樣本混合時兩者的體積比為1:1；和/或

步驟(b)中，將所述混合液轉移至所述的SLE板中后靜置時間為15min；和/或

步驟(b)中，用所述萃取劑進行萃取為兩次萃取，每次萃取時加入的所述萃取劑的體積為750μL，每次加入所述萃取劑后靜置5分鐘；和/或

步驟(b)中，用所述復溶液進行復溶時所述復溶液的用量為80μL。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述液相色譜條件中的柱溫為45℃；樣品池溫度為8℃；進樣體積為10μL；洗脫時的流速為0.5ml/min。