[發明專利]一種高靈敏檢測半胱氨酸的熒光探針及制備方法、應用

在審

• 申請號: 201810830148.6
• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN108912134A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 郝遠強;韋秀華;張銀堂;瞿鵬;徐茂田
• 申請（專利權）人: 商丘師范學院
• 主分類號: C07D491/16
• 分類號: C07D491/16;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種高靈敏檢測半胱氨酸的熒光探針及制備方法、應用，所述熒光探針的化學結構如通式I所示：本發明的制備方法為將香豆素衍生熒光團與2，4?二硝基苯磺酰氯、催化劑、溶劑混合，于室溫攪拌下反應，反應完畢后，經萃取、分離、純化，得到目標產物熒光探針。熒光探針對水體及生物體系中的半胱氨酸進行定性或定量測定。

技術領域

本發明屬于化學分析檢測技術領域，涉及有機小分子熒光探針技術領域，具體是涉及一種高靈敏檢測半胱氨酸的熒光探針及其合成和在檢測半胱氨酸方面的應用。

背景技術

半胱氨酸是一種重要的生物巰基分子，在很多生理過程中起到非常重要的作用，如維持生物氧化還原平衡，參與酶催化反應，螯合重金屬離子等。另一方面半胱氨酸體內的含量水平的異常與許多機體功能異常及疾病密切相關，如生長停滯、肌肉萎縮、毛發脫色、肝損傷、心血管疾病等。因此為了更進一步了解半胱氨酸的生理病理功能，開發高靈敏、高選擇檢測半胱氨酸的方法是非常必要的。

傳統檢測半胱氨酸的方法主要有液相色譜法、毛細管電泳法、電化學方法及比色法。但現有技術中的這些方法一般都耗時較長、涉及復雜繁瑣的樣品處理過程或需要昂貴的精密儀器等。而利用熒光探針熒光法檢測半胱氨酸具有樣品處理簡潔、成本低廉及操作簡便快速等優點，近年來得到了快速發展與利用。但目前開發的用于檢測半胱氨酸的熒光探針分子大都存在靈敏度低、水溶性差等缺點，這樣不利于實際生物樣品的分析。

因此，亟需一種更加靈敏、水溶性好的高靈敏檢測半胱氨酸的熒光探針及制備方法、應用的技術方案。

發明內容

本發明的目的是克服上述現有技術中不足，提出一種新的易于制備、性能穩定，抗干擾強的高靈敏水溶性熒光熒光探針，并提供該探針的合成方法，還在此基礎開發出對半胱氨酸進行高選擇性和高靈敏度的檢測方法。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種高靈敏檢測半胱氨酸的熒光探針，所述熒光探針的化學結構如通式I所示：

一種如所述的熒光探針的制備方法，制備通式I所示的熒光探針的化學反應式為：

所述制備方法包括如下步驟：

(1)將所述化學反應式中的香豆素衍生熒光團和2，4-二硝基苯磺酰氯作為原料加入反應器中，并加入有機溶劑進行溶解；溶解后再加入催化劑，置于室溫下攪拌、偶聯反應一段時間，并檢測是否已經完全反應；

(2)步驟(1)中的反應完全后，經萃取、分離、純化，得到目標產物熒光探針。

如上所述的制備方法，優選，所述步驟(1)中，采用薄層色譜法檢測是否已經完全反應。

如上所述的制備方法，優選，步驟(1)中，所述有機溶劑為二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一種或幾種；所述催化劑為三乙胺、二異丙基乙胺和4-二甲氨基吡啶中的一種或幾種。

如上所述的制備方法，優選，步驟(1)中，加入的所述香豆素衍生熒光團、所述2，4-二硝基苯磺酰氯和所述催化劑的摩爾比按照如下比例：

香豆素衍生熒光團∶2，4-二硝基苯磺酰氯∶催化劑為1∶1～3∶1～3。

如上所述的制備方法，優選，步驟(1)中于室溫下攪拌反應時間為0.5-2h。

如上所述的制備方法，優選，于室溫下攪拌反應時間為1h。

如上所述的熒光探針的應用，利用通式I所示的熒光探針對水體及生物體系中的半胱氨酸進行定性或定量測定。